Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Стерины. Выделение, очистка >>>

  Ответов в этой теме: 40
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Стерины. Выделение, очистка
kot
Пользователь
Ранг: 1812

31.08.2011 // 7:39:37     
Всем добрый день,
Кто работал со стеринами, интересует
1.Способы выделения из жиров (животных и растительных).
2.Способы кристаллизации после выделения
3.ТСХ смесей после выделения, условия, если есть картинка или порядок выхода.
Без этерификации.
Заранее спасибо за ответы
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1283


31.08.2011 // 10:25:56     
Редактировано 1 раз(а)


kot пишет:
Всем добрый день,
Кто работал со стеринами, интересует
1.Способы выделения из жиров (животных и растительных).
2.Способы кристаллизации после выделения
3.ТСХ смесей после выделения, условия, если есть картинка или порядок выхода.
Без этерификации.
Заранее спасибо за ответы

Экстрагировать их, имхо, можно банально по Фолчу - хлороформ:метанольной смесью (2:1 v/v) в присутствии воды, а затем выделять из экстракта в тонком слое.
Количественно их содержание можно оценить фотоколориметрически по цветной реакции с реактивом Либермана-Бурхарда, его же можно использовать для идентификации стеринов и их производных в тонком слое.
Делить можно в системе хлороформ:ацетон 96:4 или, более распространенный вариант (мне он больше нравится) гексан:диэтиловый эфир:ледяная уксусная 70:30:1 (v/v/v). Обнаруживать зоны, содержащие стерины, можно либо раствором родамина 6Ж, либо, что мне больше нравится по опыту работы, 2,7-дихлорфлюоресцеином (0,01% водно-этанольным раствором в УФ (254 нм). Порядок расположения пятен не вспомню, но могу уточнить позже, когда доберусь до лаборатории, но, имхо, проще и достовернее будет разделить смесь со стандартом - если вы в Москве, то могу поделиться хроматографически чистыми стеринами для этой цели, и покрасить сперва по Либерману, а затем фосфорно-молибденовой кислотой, чтобы оценить эффективность разделения от других ацилсодержащих липидов и липофильных компонентов.
kot
Пользователь
Ранг: 1812


01.09.2011 // 10:07:52     

Chamomillablue пишет:
1.Экстрагировать их, имхо, можно банально по Фолчу - хлороформ:метанольной смесью (2:1 v/v) в присутствии воды, а затем выделять из экстракта в тонком слое.

Количественно их содержание можно оценить фотоколориметрически по цветной реакции с реактивом Либермана-Бурхарда, его же можно использовать для идентификации стеринов и их производных в тонком слое.
Делить можно в системе хлороформ:ацетон 96:4 или, более распространенный вариант (мне он больше нравится) гексан:диэтиловый эфир:ледяная уксусная 70:30:1 (v/v/v). Обнаруживать зоны, содержащие стерины, можно либо раствором родамина 6Ж, либо, что мне больше нравится по опыту работы, 2,7-дихлорфлюоресцеином (0,01% водно-этанольным раствором в УФ (254 нм). Порядок расположения пятен не вспомню, но могу уточнить позже, когда доберусь до лаборатории, но, имхо, проще и достовернее будет разделить смесь со стандартом - если вы в Москве, то могу поделиться хроматографически чистыми стеринами для этой цели, и покрасить сперва по Либерману, а затем фосфорно-молибденовой кислотой, чтобы оценить эффективность разделения от других ацилсодержащих липидов и липофильных компонентов.
Спасибо за ответ. Воспользуемся советами.
1.Насчет Фолча есть сомнения, напомню у нас исходный продукт не биоматериал, а чистый жир. Хотелось бы получить продукт с преобладанием именно стеринов.
2. Красить обязательно? Так не разобрать?
3. Спасибо за предложение, буду в Москве в Ноябре, с удовольствием приобрел бы чистый холестерин, и парочку основных фитостреинов. За валюту есснноо
На ЛабЭкспо не пойдете?, можем пересечься
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1283


01.09.2011 // 10:42:04     

kot пишет:
Спасибо за ответ. Воспользуемся советами.
1.Насчет Фолча есть сомнения, напомню у нас исходный продукт не биоматериал, а чистый жир. Хотелось бы получить продукт с преобладанием именно стеринов.
2. Красить обязательно? Так не разобрать?
3. Спасибо за предложение, буду в Москве в Ноябре, с удовольствием приобрел бы чистый холестерин, и парочку основных фитостреинов. За валюту есснноо
На ЛабЭкспо не пойдете?, можем пересечься

Ну если жир, то сперва растворить его в бензоле и сделать тсх в системах гексан:эфир 90:10 (чтобы оценить масштабы нейтральных липидов), а затем в системе 70:30:1. В любом случае без окраски 4%-водно-изопропанольным раствором фосфорномолибденовой кислоты тут никуда. Придется еще и по Либерману красить (реактив простейший: смесь концентрированной серной и ледяной уксусной 1:1) - он позволит увидеть как свободные стерины, так и их производные - например, эфиры стеринов. Ну а затем надо придумать как эффективно отбросить нейтральные липиды - имхо удобнее всего на колонке с окисью алюминия (ее, помнится берут в 20-25 раз больше по массе, чем наносимая смесь), затем элюировать гексаном до выхода всех ТАГ и всего что может быть выше них и чуть ниже - в животных жирах частенько встречаются sn-1,2-диацил-3-ацетилглицерины. В первый раз процедура муторная, но если метод отработаете, то он вполне удобен - правда расход растворителей большой. Собираете каждые 5 мл элюата отдельно и на ТСХ их, чтобы контролировать выход ТАГ и прочих фракций..
Стерины, скорее всего выйдут вместе с МАГ, ДАГ и свободными жирными кислотами - вот эту смесь уже и делите препаративно в тонком слое. Но так или иначе красить и наносить стандарты придется, чтобы знать что где есть..
Существует какой-то другой хитрый метод - наши коллеги его даже запатентовали - осаждение стеринов на молочный казеин, попробую выяснить методику, если интересно. Но, по-моему, он работает только в суспензионных клеточных культурах..
kot
Пользователь
Ранг: 1812


01.09.2011 // 11:02:02     

Chamomillablue пишет:
.....

Спасибо, понял, будем пробовать.
Правда есть еще момент что нам в принципе не нужно колличесвенное извлечение. Это что то меняет?
В этом ключе ГОСТовский вариант типа "заливаем жир 80% этанолом, после декантируем, упариваем и получаем красивые кристаллы стеринов" прокомментируйте пожалуйста.
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1283


01.09.2011 // 11:12:04     

kot пишет:

Chamomillablue пишет:
.....

Спасибо, понял, будем пробовать.
Правда есть еще момент что нам в принципе не нужно колличесвенное извлечение. Это что то меняет?
В этом ключе ГОСТовский вариант типа "заливаем жир 80% этанолом, после декантируем, упариваем и получаем красивые кристаллы стеринов" прокомментируйте пожалуйста.

Ну если метод работает и позволяет получить стериновую фракцию нужной чистоты - то почему бы и нет ) просто в любом случае в спирт уйдут и некоторые нейтральные липиды, в небольшом, правда, количестве, но все-таки )
Я просто с сырыми жирами не работал.. Привык все делить на фракции и анализировать по отдельности )))) но у нас цели такие... )
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Всероссийское масс-спектрометрическое общество (ВМСО) Всероссийское масс-спектрометрическое общество (ВМСО)
Общественная организация, объединяющая на добровольных началах ученых и специалистов, занятых научно-исследовательской, производственной и преподавательской работой в области масс-спектрометрии и ее приложений, а также всех людей интересующихся этим методом.
sinthetic
Пользователь
Ранг: 3523


01.09.2011 // 11:16:03     
Редактировано 2 раз(а)


kot пишет:

В этом ключе ГОСТовский вариант типа "заливаем жир 80% этанолом, после декантируем, упариваем и получаем красивые кристаллы стеринов" прокомментируйте пожалуйста.

Да, в своё время приходилось масштабно выделять фосфолипиды. При стоянии этанольных растворов подавляющая часть холестерина всегда выкристаллизовывалась, даже без упаривания. Минорные стерины не смотрели за ненадобностью.
N.B. Детали подзабыл, но при стоянии водно-ацетоновых экстрактов (воды где-то до 1:3) кристаллизация ХС шла ещё лучше. Нейтральные липиды (т.е. жиры) оставались в растворе. Да и перекристаллизацию осадка вести несложно.
kot
Пользователь
Ранг: 1812


12.09.2011 // 14:03:09     

sinthetic пишет:

kot пишет:

В этом ключе ГОСТовский вариант типа "заливаем жир 80% этанолом, после декантируем, упариваем и получаем красивые кристаллы стеринов" прокомментируйте пожалуйста.

Да, в своё время приходилось масштабно выделять фосфолипиды. При стоянии этанольных растворов подавляющая часть холестерина всегда выкристаллизовывалась, даже без упаривания. Минорные стерины не смотрели за ненадобностью.
N.B. Детали подзабыл, но при стоянии водно-ацетоновых экстрактов (воды где-то до 1:3) кристаллизация ХС шла ещё лучше. Нейтральные липиды (т.е. жиры) оставались в растворе. Да и перекристаллизацию осадка вести несложно.

Попробовали.
1. При стоянии спиртовый экстракт мутнеет не более того.
2. ТСХ картинку прикладываю.
www.biomer.ru/index.php?part=library&article_id=138
Пластинка Мерковская, проявляли серной. Извиняюсь за качество картинки (артефакты, "кривые" зоны), это так сказать пробный вариант. НО! Лично мне не нравится "общий вид". Явно выраженных селективных зон (пусть например ХС и ситостерина) как-то не видно. Причем с реальными продуктами (мороженое, молоко итд) картинка еще хуже.
Буду благодарен за любые наставления на путь истинный
Можно прямо на сайте компании
Garry
VIP Member
Ранг: 1076


12.09.2011 // 16:35:41     
Вообще-то, были упоминания о стеринах на anchem.ru/forum/read.asp?id=138. В принципе стерины - не омыляются, поэтому что мешает "поварить" исходный жир с КОН и отделить гексаном стериновые, неомыляемые фракции.
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1283


26.09.2011 // 19:44:13     
напишите лучше мне на мыло roman.sidorov{coбaчkа}mail.ru если вам еще нужны стандарты стеринов )
Дмитрий (anchem.ru)
Администратор
Модератор форума
Ранг: 4367


28.02.2012 // 21:52:35     
Редактировано 4 раз(а)

Коллеги, возникла аналогичная задачка.
Нужно посмотреть на ГХ-МС и иные компоненты некоторого растительного масла (стерины, пахучие в-ва и тп). Вариант через экстракцию этанолом, упаривание до минимального объема и перерастворение в гексане с последующей этерификацией (иправлено вместо неверного "омыления") КОН в метаноле - кажется неприемлемым, как ввиду отсутствия чистого этанола, так и опасения появления примеси этиловых эфиров на хроматограмме. Только что попробовал метанол - не смешивается с маслом. Явно переходит запах и малая часть масла. Получится так обогатиться минорными компонентами относительно основных жирных кислот? Делал так кто-нибудь? Проверять конечно все равно экспериментально придется, но вдруг уже есть опыт?

Варианты уколоть метанольный экстракт без этерификации (иправлено вместо неверного "омыления") напрямую - не рассматриваю жалко систему
Может кто делал лично через омыление водным КОН гексанового раствора масла с последующим уколом гексановой фракции? что там остается в гексане?

При просто этерификации по ГОСТу метанольным 10% КОН на хроматограмме кроме метанольных эфиров видели и терпенов несколько (но меньше "штук", чем при анализе паровой фазы с концентрированием).

  Ответов в этой теме: 40
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты