Форумы ANCHEM.RU: Реактив для определения глюкозы крови (mml)

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Реактив для определения глюкозы крови (mml) >>>

Ответов в этой теме: 6

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Реактив для определения глюкозы крови (mml)

Bars
Пользователь
Ранг: 3

07.07.2005 // 23:49:26

Я на форуме Вашем первый раз, извините, если не туда попал))
Существует такой вопрос.
Глюкометры, для определения уровня глюкозы в крови все работают с тест-полосками. Но принцып разный:
Есть электрохимический есть (на тест-полоске 2 контакта и участок повидимому пропитанный каким то реактивом).
Другой тип приборов определяет %глюкозы по интенсивности окраски участка тест-полоски (от желтого до темно зеленого)помещаемой в прибор после нанесения на это место капли крови.
Время определения от 5 до 60 сек на разных глюкометрах. Сам этот "элемент" - бумажка 2х2мм пропитанная каким то реактивом.
Я понимаю, что мой вопрос можно игнорировать по многим причинам, но кто сможет ответить плиз скажите.
Дикая цена на расходники (полоски) мотивированна скорее потребностью в них а не ценой материала.
Вот меня интересует принцип такого анализа, состав реактивов и возможность вообще заниматься этим вопросом (не самому конечно)), хотелось бы найти альтернативу.. даже в кустарных условиях.
Есть шанс вообще создать такой реактив из не "сверх секретных" компонентов, который будет реагировать на разный %глюкозы изменением окраски?
Извините, если напутал что нибудь.
Жду ответа.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Garry
VIP Member
Ранг: 1076

08.07.2005 // 15:47:14

Секрета никакого нет, все бумажки работают по принципу глюкозидазного метода определения глюкозы. А принцип состоит из того, что глюкозу детектирует фермент глюкозидаза вместе с пероксидазой 1:1. При этом выделяется перекись водорода, которая и окрашивает окислительно-восстановительный индикатор (о-толидин)из желтого в синий цвет. Вот и вся премудрость. Полоска пропитана раствором фермента и буфера, при смачивании жидкостью, имеющей в своем составе глюкозу происходит ферментативная реакция с выделением перекиси водорода, которая и учитывается индикатором. Методов определения глюкозы существует масса начиная от Хагедорна-Иенсена(феррицианидный метод), метод энзимных мембран (прибор Эксан), метод о- толуидиновый, метод Варбурга, с антроном, энзиматический.

Bars
Пользователь
Ранг: 3

11.07.2005 // 3:05:10

Garry пишет:
Секрета никакого нет, все бумажки работают по принципу глюкозидазного метода определения глюкозы. А принцип состоит из того, что глюкозу детектирует фермент глюкозидаза вместе с пероксидазой 1:1. При этом выделяется перекись водорода, которая и окрашивает окислительно-восстановительный индикатор (о-толидин)из желтого в синий цвет. Вот и вся премудрость.

Спасибо за подробный ответ!!
Теперь понятна огромная цена на тест полоски. О-толидин стоит 1200р за 1кг. Глюкозидазу не нашел, а пероксидаза 2-4тыс$ за 1 грамм. !!!
Производят из хрена - выход 1гр из 100кг. хрена.
Опять прошу совета. Реально использовать один из этих методов, который вы описали для эксперементов хотябы, с доступными более или менее реактивами.
Смысл в том, что желание огромное, да и руки не кривые вроде бы, но знаний на эту тему явно не хватает)).
Или опустите меня на землю своим ответом, что такие вещи не реальны. Суть в том, что люди (и я в том числе) на что только не идут, чтобы удешевить эти тесты. Чем чаще тест, тем дольше протянешь с диабетом то....
Полоски и водой промывают, потом сушат и растворами разными. Состав смывается не весь и прибор определяет какую то цифру..если одинаково полоски обработать, то потом сверив показания с реальными, можно определить коэффициент, на основе которого потом можно из показанной прибором суммы с помощью математики "вытаскивать" реальные показатели.
Если бы добиться эффекта, когда от концентрации глюкозы в крови изменялся бы цвет пленки, то с прибором тож как нибудь победили бы.
Как по вашему, реально это (даже при определенных усилиях)? Ну и естесственно по себестоимости..
Спасибо, если снова услышите мой вопрос.!!

kot
Пользователь
Ранг: 1986

11.07.2005 // 8:13:37

Bars пишет:

Garry пишет:

Опять прошу совета. Реально использовать один из этих методов, который вы описали для эксперементов хотябы, с доступными более или менее реактивами.
Ферментативные методы определения на самом деле очень распространены (к моему сожалению), в следствии чего (у нас в Н-ске, например) существует куча организаций которые производят эти ферменты, цены вы смотрите на импортные, наши раз так в десять дешевле, правда, наверное, во столько же раз хуже, выбор за вами.

Garry
VIP Member
Ранг: 1076

11.07.2005 // 15:35:07

Редактировано 1 раз(а)

Уважаемый Bars Вашему горю легко помочь. Глюкозу в крови, моче и где попало легко определяют орто-толуидиновым методом. О-толуидин значительно дешевле о-толидина. Да и реактивы не проблема. Если имеются деньги, то можно пойти двумя путями:
1. Купить готовый о-толуидиновый реактив в фирме, которая продает реактивы для клинико-диагностических лабораторий больниц. Он там обязательно есть !
2. Сварить реактив самостоятельно, запасшись перегнанным о-толуидином (должен быть слегка желтого цвета и ни в коем случае коричневым, он легко переганяется в вакууме.), тиомочевиной и уксусной кислотой.
Пропись реактива по немецкой книженции "Praktikum der Biochemie fur Studirende der Medizin und Stomatologie" J.A.Barth Johann Ambrosius Barth 1986. даю в понятном виде :
19,7 мМоль тиомочевины растворяют в 200 мл ледяной уксусной кислоты, к раствору добавляют 660 мМоль перегнанного о-толуидина и доводят до метки ледяной уксусной кислотой. Раствор перемешивают дают созреть сутки - и все!

Далее готовят стандартный раствор глюкозы 6 мМоль/л. Добавляя в качестве концерванта либо азид натрия либо бензоат натрия в количестве 0,05 %.
И наконец, если Вы определяете глюкозу в белок содержащих растворах (кровь, сыворотка) то Вам понадобится 3% ТХУ (трихлоруксусная кислота).
Далее можно поступать как Вам заблагорассудится, т.е. построить калибровку используя различные разведения стандарта глюкозы, но чаще всего используют калибровку по одной точке. Т.е. в крови норма глюкозы составляет 6 ммоль/л. Значит это и есть вожделенное ожидаемое значение !
Параллельно с пробами одну пробирку отводят под стандарт, с кторым проводят все манипуляции как с пробами, а затем рассчитывают концентрацию по ф-ле: Сг = 6,0*(Дпр/Дст) (ммоль/л). Если глюкозы очень много, то используют разведение и оыт повторяют учитывая разведение.
А процесс определения заключается в следующем :
0,1 мл крови + 1,00 мл 3% ТХУ -> выдерживают 5 минут и центрифугируют.
Далее берут три пробирки в которые добавляют :
В первую 3,5 мл о-толуидинового реактива + 0,5 мл 3% ТХУ (Холостая проба, против которой измеряют оптическую плотность).
Во-вторую 3,5 мл о-толуидинового реактива + 0,5 мл раствора стандарта разведенного водой в соотношении 1:11 (стандарт:вода)
В третью 3,5 мл о-толуидинового реактива + 0,5 мл центрифугата пробы.
Пробирки встряхивают.
Затем на кипящей бане в течение 10 минут. Охлаждают пробирки под струей воды и ФЭКают при 630 нм в 1 см кювете. А далее по вышеуказанной формуле рассчитывают количество глюкозы.

Bars
Пользователь
Ранг: 3

11.07.2005 // 20:47:49

Спасибо Garry !!!
Сложно, но зато реально. Буду пробовать.
Не зря я к Вам зашел)))

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Вакуумный шкаф UT-4630V
Предназначен для сушки термочувствительных легко разлагающихся веществ, подверженных быстрому окислению. Уменьшение времени нагрева более чем на 50%, по сравнению с традиционными вакуумными сушильными шкафами. Объем камеры: 20 л (1 полка). Температурный диапазон: от +10 до +200ºС.

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

Garry
VIP Member
Ранг: 1076

12.07.2005 // 9:34:36

Извините за неточность. Уточняю, о-толуидиновый реактив готовят в объеме 1 литра, а это значит , "довести до метки ...." значит довести объем реактива уксусной кислотой ледяной до 1 литра.


Ответов в этой теме: 6	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты