Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ УФ: определение тетрациклина, не выходит стандарт >>>

  Ответов в этой теме: 29
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: ВЭЖХ УФ: определение тетрациклина, не выходит стандарт
xelen5
Пользователь
Ранг: 36

03.03.2010 // 16:01:08     
Кто делает тетрациклин?
Помогите разобраться с выходом стандарта, а точнее с невыходом . Подвижная фаза (рН 3) в изократике
ацетонитрил:0,05м ацетат аммония (23:77), может кто работает в градиенте, поделитесь...
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Леонид
VIP Member
Ранг: 5266


03.03.2010 // 18:19:27     

xelen5 пишет:
Кто делает тетрациклин?
Помогите разобраться с выходом стандарта, а точнее с невыходом . Подвижная фаза (рН 3) в изократике
ацетонитрил:0,05м ацетат аммония (23:77), может кто работает в градиенте, поделитесь...

В такой формулировке сути проблемы Вы вынуждаете отвечать на вопрос встречными вопросами.
Что за методику Вы используете (источник)? Откуда и почему у Вас именно такой состав элюента? Что в конфигурации вашего ВЭЖХ оборудования и условиях его работы не совпадает с используемой методикой (колонка, сорбент, скорость потока, длина волны детектирования и пр.)?
Чем подробней вы опишете условия анализа и алгоритм своих действий, тем проще и большей вероятностью можно будет Вам помочь.
xelen5
Пользователь
Ранг: 36


04.03.2010 // 10:02:26     
Спасибо что ответили,
Подробности воспроизведения методики на моем любимом Agilent 1200 с диодно-матричным детектором:
Методика: SOP No: CLG-TET2.01; Qualitative Identification of Tetracyclines in Tissues.
Элюент: Prepare 0.05 M ammonium acetate solution by weighing 3.85 g ammonium acetate into a 1 L beaker and dissolving it in 900 mL distilled water. Adjust pH of solution to 3.0 ± 0.5 with trifluoroacetic acid. Transfer to a 1 L volumetric flask and dilute to volume. To prepare mobile phase, combine 770 mL ammonium acetate solution with 230 mL acetonitrile, filter and degas.
Вместо рекомендуемой кислоты использовала ангидрид (для доведения рН )
Не совпадает колонка:по методике: Prodigy C8, 5 micron, 250 x 3.2 mid-bore, у меня - ZORBAX Eclipse XDB - C18, 5 micron, 250х 4,6 мм.
Стандарт тетрациклина растворяла в метаноле.
Attenuation: 2^7 or 2^4 for low level standards and samples - (не могу перевести), все ниже приведенные условия соблюдены до мулиметра:
Injection volume: 35 .L
Flow rate: 0.6 mL/min
Sensitivity: 2.0 AUFS
Wavelength: 375 nm
Column heater: 35°C

Леонид
VIP Member
Ранг: 5266


04.03.2010 // 19:40:17     
Понятно. А почему Вы решили что колонки С8 и С18 должны вести себя одинаково? Это ощутимо разные по свойствам и по емкости сорбенты.
Неудивительно, что у Вас целевое вещество не выходит.
Для этого нужен более сильный элюент.
Мне просто интересно, Вы ничтоже сумнящеся произвели смену колонки, причем совсем даже не на аналог, а поварьировать состав элюента от рекомендованного в методике - смелости не хватает.
Увеличивайте содержание ацетонитрила в элюенте до тех пор, пока из колонки не появится целевое вещество с приемлемым удерживанием, аналогичным тому, что указано в методике.
Начнете работать с пробами, возможно, придется состав элюента окончательно подкорректировать, если понадобится отстроиться от некоторых примесей.
Волгин
VIP Member
Ранг: 1326


04.03.2010 // 19:57:09     
Я тоже хотел что-то такое написать, но потом посмотрел характеристики сорбентов.
Да, колонка с Зорбаксом в 2 раза больше по объему. Но. У Продиджи привитого углерода 12,6%, а у Зорбакса - 10%. Несмотря на то, что первый - С8, а второй - С18. В общем, кракозябра получается какая-то...
Леонид
VIP Member
Ранг: 5266


04.03.2010 // 20:12:42     

Волгин пишет:
Я тоже хотел что-то такое написать, но потом посмотрел характеристики сорбентов.
Да, колонка с Зорбаксом в 2 раза больше по объему. Но. У Продиджи привитого углерода 12,6%, а у Зорбакса - 10%. Несмотря на то, что первый - С8, а второй - С18. В общем, кракозябра получается какая-то...

Юра! Процент прививки - важная характеристика, но не самая определяющая. При такой громоздкой молекуле анализируемого вещества расчитывать на аддитивность в удерживании сложно. Стерический фактор на С8 и С18 проявляется несколько иначе.
Все равно ожидать одинаковых свойств сорбентов не приходится.
Подбирать новый состав элюента придется в любом случае...
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Спектрофлуориметр CM 2203 Спектрофлуориметр CM 2203
Полностью управляемый от компьютера спектрофлуориметр для ультрафиолетовой и видимой области спектра, обеспечивающий высокочувствительные и стабильные измерения спектров возбуждения, испускания, синхронных, поляризации, температурных, квантового выхода, поглощения жидких и твёрдых образцо
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
virtu
VIP Member
Ранг: 2135


04.03.2010 // 20:19:35     
Редактировано 1 раз(а)

0,6 мл/мин =>1мл/мин
30-40%МеСN
Волгин
VIP Member
Ранг: 1326


04.03.2010 // 20:32:15     

Леонид пишет:
...Подбирать новый состав элюента придется в любом случае...
Вот и я об этом...
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


04.03.2010 // 20:48:06     
Редактировано 2 раз(а)

А мое ИМХО такое, что у них банально грязный MeCN (или вода, или буфер, или все вместе). Настолько, что на 375 нм она банально ничего не увидит. А судя по тому, как тупо копирует метОду, если и увидит когда, то нескоро.
Потом, а что это за нововведение такое- заменять CF3COOH ангидридом (уксусной кислоты, надо понимать)?
Насчет линейной и объемной скорости правильно сказали- вместо 0,6 надо 1,0 минимум. (по соотношению диаметров колонок).
Ну и наконец, непонятно, какие ppm тетрациклина она ловить собирается. А то и правда- все бесполезно будет.

ЗЫ. Неужто это настолько трудно (имея ДАД, не иметь градиентную ВЭЖХ?) запустить градиент и оптимизировать изократику? Почему надо тупо копировать чей то старый результат? У нас теперь мода такая- у ВЭЖХ сидят все, кому не лень?

Сначала не хотел ввязываться, но уже реально достало. Форум превратился в детский сад, скоро начнут спрашивать про совершенно уже глупые вещи. Книжки хоть иногда в руки берут??? Или как все в РФии делается- абы как? Никогда еще не было такой доступности литературы по основам ВЭЖХ. Хоть в электронном виде, хоть в каком другом. На любой вкус и цвет. Не хотите на аглицком? Читайте на русском Стыскина-Ициксона-Брауде. Толковей, проще и понятней уже нет ничего. Или мы не ищем легких путей? Не позорьте профессию.
Волгин
VIP Member
Ранг: 1326


04.03.2010 // 21:00:16     

Serga пишет:
Потом, а что это за нововведение такое- заменять CF3COOH ангидридом (уксусной кислоты, надо понимать)?

А я почему-то понял, что ангидридом трифторуксусной...
DSP007
VIP Member
Ранг: 2228


04.03.2010 // 21:04:45     
Редактировано 1 раз(а)

Видать мода такая. Ангидрид- жесть, в юмор.
Касательно ацетонитрила- вы видели яркожелтый ацетонитрил? Я -нет, не в ацетонитриле дело.
1) Ангидрид до нужной рН не доводит, вообще меня терзают смутные сомненья , что ангидрид уксусной кислоты в этой фазе гидролизуется полностью до уксусной.
2) Я думаю дело в другом. C-8 Zorbax имеет малую степень прививки ( и я не уверен что проходит эндкеппинг, ибо сорбент довольно древний) и если на нем долго работали в кислотах- то с силикагеля прививка слезает и сорбент кроме неполярных начинает проявлять еще и катионобменные свойства, избирательно удерживая амины . Лет десять назад я с этим столкнулся на галоперидоле. А тетрациклин имеет третичную аминогруппу ...

  Ответов в этой теме: 29
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты