| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
денситометрия >>>
|
 |
| Автор | Тема: денситометрия |
|
olgarozen Пользователь Ранг: 1 |
 07.03.2008 // 17:34:29
Здравствуйте! У меня проблема с количественнм определением содержания липидов денситометрией. Я пользуюсь денситометром Сорбфил (Краснодар). По этому методу определяется только относительное содержание. но не абсолютное. Как можно определять абсолютное содержание вещества (например, липида) после ТСХ? |
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|
DSP007 VIP Member Ранг: 2228 |
07.03.2008 // 23:17:41
Редактировано 1 раз(а) Все очень просто- делается разведение стандартного образца липида, точки разведений наносятся на пластинкув параллель с пробой, пластинка прогоняется, обрабатывается, денситометрируется, строится калибровочная кривая, определяется количество. Есть одна маааленькая сложность- нужно иметь пяток миллиграмм искомого липида 
|
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
11.03.2008 // 14:13:38
Я, например, разработал АНД для определения количества фосфолипидов в легочном сурфактанте методом ТСХ. Необходимость именно в таком методе возникла не случайно. Во-первых, традиционный метод по неорганическому фосфору не катит, поскольку, "количество" фосфолипидов "легко" подкорректировать неорганическим фосфатом. Во-вторых для такого стандартного метода необходимо было штук сорок ампул препарата немалой стоимости всего лишь для одной повторности. И в-третьих - муторное и капризное дело - определение по минеральному фосфору. "Богатые" хроматографисты предложили бы нечто типа ELSD или еще по-круче - тандемную ВЭЖХ масс-спектрометрию, но .... реалии жизни лежат довольно далеко от подобных технологий, да и стоимость анализа будет очень сильно кусаться. Теперь по-теме. Не обязательно иметь точь-в-точь тот же липид для стандарта. Желательно, но не обязательно. Ведь проявление липидов неспецифично. То ли 10 % раствор фосфорно-молибденки в этаноле, то ли родамин Ж будет проявлять одинаково любой триглицерид и холестерин. С фосфолипидами есть некоторые различия. Единственно о чем нужно помнить, так это о линейном диапазоне Вашего метода проявления липидов. Стандартно, при визуализации веществ на ТСХ пластине линейность соблюдается более-менее в диапазоне нанесенных масс от 0,5 до 8 мкг в случае видимого света и несколько шире этот диапазон при флуоресцентной детекции.(от 3 нг до 20 мкг). Поэтому для определения количества Вашего липида возьмите более подходящий и доступный (триглицерид, фосфолипид ...). Сделайте раствор с концентрацией 1000 мкг/мл, например в смеси Фолча. Нанесите на пластинку Ваш образец, помня, что нанесенная масса отдельного экземпляра липида не должна превышать 8 мкг (хотя в сумме липиды образца могут быть и более чем 8 мкг). Рядом с пробой нанесите не менее трех точек с раствором стандарта. Например, зная, что раствор с концентрацией 1000 мкг/мл - это 1 мкг в 1 мкл, наносят 2 мкл, 4 мкл, 8 мкл. В результате проявления Вашей пластинки Вы будете иметь треки с стандартными количествами триглицерида 2, 4 и 8 мкг и соответственно трек с пробой. Обработайте пластинку с помощью Вашего "Сорбфил-Видеоденситометр", получите данные для калибровки (площадь стандартного пика - нанесенная масса). А далее на треке пробы отыщите нужный Вам пик искомого липида и подставьте площадь его пика в уравнение регрессии, которое Вы получите по калибровке. Таким образом, Вы узнаете количество в мкг искомого фосфолипида в том объеме, который Вы нанесли на пластинку. Затем, я думаю, особого труда не составит пересчитать на конечный объем экстракта. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 2 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
