Форумы ANCHEM.RU: нингидриновый количественный метод для определения альфа-аминного азота

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

нингидриновый количественный метод для определения альфа-аминного азота >>>

Ответов в этой теме: 4

[ Ответ на тему ]

Автор	Тема: нингидриновый количественный метод для определения альфа-аминного азота
aslovo Пользователь Ранг: 2	30.01.2007 // 0:30:29 Уважаемые коллеги, не подскажете работающую методику для количественного определения альфа-аминного азота с помощью нингидрина?
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246
Garry VIP Member Ранг: 1076	30.01.2007 // 10:20:50 Если у Вас имеется раствор пептидов, то поступают следующим образом : 0,3 мл исследуемого раствора + 1 мл 2,5 н NaOH. Инкубируют при 90°С в течение 2,5 ч. Затем добавляют 1 мл 30% уксусной кислоты и далее проводят нингидриновую реакцию следующим образом : к пробе добавляют 0,25 мл 0,2 М цитратного буфера рН-5 содержащего 0,2 % SnCL2, смесь перемешивают, добавляют 0,25 мл 4 %-ного раствора нингидрина в пропаноле. Помещают в кипящую баню на 10 мин. Охлаждают и добавляют 3 мл 50% пропанола. Раствор перемешивают и колориметрируют при 570 нм. Т.Дэвени, Я.Гергей "Аминокислоты, пептиды и белки" М."Мир" 1976, с.228
aslovo Пользователь Ранг: 2	30.01.2007 // 13:41:57 спасибо за информацию. именно этой методикой я пользовался, и у меня возникли проблемы - окраска появляется и через 5 мин. ослабевает (по Moore & Stein нужно греть 20 мин; дык он становится желтым как и был. У Вас 10 мин. и раствор нингидрина в пропаноле, а не в метилцеллозольве. У меня не было последнего и я брал этилцеллозольв. Попробую Вашу методику, но будут наверное сложности с растворением хлорида олова (2). У меня получается суспензия. Нигде не пишут, что так и должно быть. Может олово старое? Поэтому я собираюсь использовать другой восстановитель, например, аскорб. к-ту. Не слышали, случаем, про такое?
Garry VIP Member Ранг: 1076	30.01.2007 // 16:31:56 aslovo пишет: спасибо за информацию. именно этой методикой я пользовался, и у меня возникли проблемы - окраска появляется и через 5 мин. ослабевает (по Moore & Stein нужно греть 20 мин; дык он становится желтым как и был. У Вас 10 мин. и раствор нингидрина в пропаноле, а не в метилцеллозольве. У меня не было последнего и я брал этилцеллозольв. Попробую Вашу методику, но будут наверное сложности с растворением хлорида олова (2). У меня получается суспензия. Нигде не пишут, что так и должно быть. Может олово старое? Поэтому я собираюсь использовать другой восстановитель, например, аскорб. к-ту. Не слышали, случаем, про такое? Про аскорбинку как восстановитель для этих целей я не слышал. А вот раствор хлорида олова я готовил следующим образом. Навеску продажного хлорида олова (0,2 г) я растворял при нагревании в 10 мл конц. солянки + 10 мл воды, а затем доводил до метки после растворения последнего. Конечно может происходить потеря кристаллизационной воды при хранении и старение старых реактивов, то тогда раствор хлорида олова получают из непосредственно чистого олова (в палочках) и солянки. В принципе, Вы можете проверить качество Вашего хлорида олова по следующей методе : 0,5 г хлорида олова растворяют в 15 мл соляной кислоты (конц.), добавляют 10 мл воды и 5 мл хлороформа. Затем быстро титруют 0,05 М раствором йодата калия до обесцвечивания хлороформенного слоя. 1 мл 0,05 М йодата калия соответствует 22,56 мг SnCL2*2H2O
Garry VIP Member Ранг: 1076	30.01.2007 // 16:36:00 Да, если у Вас пептиды состоят преимущественно из пролина и оксипролина, то фиолетовой окраски Вы не дождетесь.


Ответов в этой теме: 4	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты