| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
HPLC >>>
|
 |
| Автор | Тема: HPLC | |||||
|
khrushh Пользователь Ранг: 70 |
 11.05.2006 // 18:06:46
Требуется разделить пептиды. Обратнофазка в градиенте не помагает. хотелось бы попробовать катионообменник но при элюции соль буфера весь сигнал забьёт т.к. детекция на 226 (нет ароматики) Может кто нибудь помочь моему горю? |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
pumatnv Пользователь Ранг: 55 |
11.05.2006 // 18:18:32
Странно, что обращенка не помогла... А в каких условиях Вы делали - колонка, режим элюции, элюент? |
|||||
|
khrushh Пользователь Ранг: 70 |
11.05.2006 // 18:33:22
Колонка Separon C18 3 на 150 мм, 226 nm, градиент ацетонитрила от 0 до 100%, за 40 мин, поток 0,8 мл/мин. Пробовали менять градиент (делать более пологим) ничего принципиально не меняется. Пептид содержит много лизина поэтому и хочу попробовать на ионообменнике |
|||||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1335 |
11.05.2006 // 18:59:25
Ваще-то обычно добавляют или от 0,05 до 0,1% трифторуксусной кислоты или фосфатного буфера с различным рН и концентрацией и, варьируя все это, добиваются искомого результата. Кроме того, стекляшки (насколько я понимаю)с Сепароном - не лучший вариант для разделения пептидов. Попробуйте другие С18 и С8 колонки. Кроме того, можно попробовать фенильную или С10СN фазу - у них иная селективность. |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
11.05.2006 // 19:40:27
Несколько неудачное решение в посте автора, но в целом ситуация ясная - действительно, мучаться неохота, раз сразу не вышло  Ну, тут для поклонника чеховских колонок ясно что делать. Берите те же Сепароны, но те, которые аминофазы. Берите просто смесь ацетонитрила с водой. Не заморачивайте себя и всех остальных градиентами, работайте в изократе (заодним и длину волны можно уменьшить до 205нм). Начните с 30% воды в элюенте, и убавляйте ее до тех пор, пока не будет нужного разделения (думаю, где-то в районе 15% это случится). Если поприкалываться с этой системой дальше (бывают люди со свободным временем и чувством юмора), можете прочитать статью Леонида (в журнале на форуме) по динамического модифицированию и вбухнуть туда же перхлората лития - можете получить разнообразные разделения вплоть до самых невероятных А можно и сильный ионообменник, лучше на основе силикагеля, да и стоит он дешево. И спокойно добавляйте соль... фосфаты, трифторацетаты, перхлораты и прочие прозрачны в этом диапазоне... |
|||||
|
khrushh Пользователь Ранг: 70 |
11.05.2006 // 20:15:41
To Волгин Я бы с рабостью, да из обратнофазных только с8 и с18... А ТФУ я конечно добавляю То КонстантинС Вы имеете ввиду слабоосновные типа сепарон CN? А будут ли они эффективны у меня ведь высокоосновный пептид? Да и для такой длины волны боюсь придется с загашника ацетонитрил доставать мой обычный боюсь поглащать будет...Фосфаты разве не поглащают на 226?? |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
11.05.2006 // 21:24:46
Аааааа... не в солях, значит, дело, а в общелабораторском помойном ацетонитриле так и скажите... Могу дать маленки, но отшень полесны софетт - добавить в него 20% воды и с хорошим дефлегматором отогнать чистейший азеотроп, коий и использовать как основу элюентов (а может и приторговывать  ).Начет теории не волнуйтесь, просто сделайте по прописи (вот там, выше) - и все получится. Только не надо никакого нитрила, возьмите аминофазу (NH2). Если уж нет аминофазы, то просто силикагель. Если ж пептид выскоосновный, то г-н Волгин может набить Вам колоночку карбокси-силикагелем, на котором можно работать на обычных водных буферах, опускаясь хоть до 200нм (просто буфер надо подержать над активированным углем), и получая кучу опыта варьированием ионной силы и рН (только не перестарайтесь, условия должны быть мягкими). |
|||||
|
G.Baram VIP Member Ранг: 211 |
12.05.2006 // 10:31:01
Редактировано 1 раз(а) В качестве соли можно взять перхлорат лития. Даже его 4М раствор прозрачен до 200 нм. Годится и перхлорат натрия. Работать лучше при рН 2.5. Подкислять хлорной кислотой. |
|||||
|
khrushh Пользователь Ранг: 70 |
12.05.2006 // 11:22:04
Бедность не порок, уважаемый КонстантинС Про азеотроп вы дело говорите, надо попробовать Карбокси-силикагель это интересно, укажите пожалуйста если не сложно торговые названия, а карбокси метил целлюлоза или её фосфат подойдет? |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
15.05.2006 // 9:53:34
Не, мне чего-то в последнее время кажется, что порок... совсем испортился Ну, название Диасорб Карбокси, соответственно, БиоХимМак, вот... |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 9 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
