| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Простая и понятная база соответствий колонок и подвижных фаз для белков и пептидов >>>
|
 |
| Автор | Тема: Простая и понятная база соответствий колонок и подвижных фаз для белков и пептидов |
|
igorchem Пользователь Ранг: 333 |
 13.10.2015 // 17:47:58
Добрый день, опять я к Вам со своими тараканами. Посоветуйте, пожалуйста, САБЖ. Хочется, чтобы было понятно, что для таких-то колонок и таких-то аминокислот, или пептидов, или белков надо брать такую-то подвижную фазу... читаю бегло по-русски, английски, немецки, на крайняк дочка с французского переведет. Вопрос вызван тем, что попробовал из общих соображений поделить самопально сделанную смесь полимеров аспаргиновой кислоты (спек ее, чтобы получить полимеры), в качестве колонки брал Nucleosil® C18 HPLC Column 5 μm particle size, L × I.D. 10 cm × 4.6 mm, эллюэнтом - этанол с водой 1:1, вначале вылезло два маленьких левых пика примесей (не смог понять что) и потом все вылезло одним горбом, в котором сенсором угадывалось, что вначале был мономер, потом пик димера, и тд. Скорость была 0.1мл/мин, из-за сенсора. Цель всего, как я тут раньше писал, потестировать свой спектральный сенсор и понять на сколько он хорош. То есть если кто-то смог бы мне посоветовать пару-тройку интересных экспериментов что поделить и не потратить на исходные вещества уйму денег, был бы премного благодарен! Спасибо! |
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|
AA_Alex Пользователь Ранг: 377 |
14.10.2015 // 12:48:08
Для аминокислот/пептидов самый стандартный вариант разделения - это плавный (длинный) градиент от 2-5% до 50% или даже больше ацетонитрила с 0,1% ТФУ (вода тоже делается с 0,1% ТФУ) на С18 колонке. Для белков то же самое, но сорбент должен быть специально "заточен" под крупные молекулы (размер пор 300Å и больше). Аминокислоты (если это не ароматические) без дериватизации вы УФ-детектором не увидите. И как это вы интересно "спекли" из аспарагиновой кислоты пептиды? Синтез пептидов не самая тривиальная вещь. |
|
Valeriy Пользователь Ранг: 431 |
14.10.2015 // 17:47:19
Редактировано 3 раз(а) Вполне возможно уважаемый igorchem использовал микроволновой синтезатор коротких пептидов, к примеру . Поэтому и написал "спекли". Колонки С18 в этом виде анализа (если предполагается анализ, а не очистка) будут служить не долго - по моему опыту полгода, год. Лучше использовать какую нибудь ионообменную смолу. Обойдется дороже, но срок службы побольше. Но пептиды пептидам рознь, да и у меня опыт не очень большой. А начинать анализ нужно не с готового продукта, а с исходных аминокислот: времена удерживаний для каждой, нет ли наложений пиков, какие примеси (как без них) в исходных веществах. А потом пробовать делить готовый продукт. Масса тонкостей, интересная работа! Да вот забыл. Этанол в химии - незаменимая весч,  , но где вы прочитали что его используют для хроматографирования пептидов?
|
|
igorchem Пользователь Ранг: 333 |
15.10.2015 // 10:45:57
Редактировано 4 раз(а) 2 AA_Alex огромное спасибо за методику, про трифторуксусную - это очень классно, мне как раз она подошла бы для сенсора  а я не говорил, что у меня УФ, спектры-то разные бывают но пока пожалуйста, давайте этот момент не обсуждать, примите, пожалуйста, за данность, что концентрированный раствор глутаминовой и аспарагиновой кислот моим сенсором можно очень хорошо друг от друга отличить, другое дело, что пока я не могу сказать что де это глутаминовая или аспарагиновая, но это, я надеюсь, поправимо Спекал по методике, описанной в главе полиаспаргиновые кислоты по ссылке Про этанол - из общих соображений, да и в гугле такие методики встречаются, правда тоже с градиентом. У меня градиента не было, и, честно говоря, по возможности хотелось без него. Как я как-то до этого писал, основная цель у меня - отладить сенсор и понять что он может детектировать, а не самоцель - делить пептиды и белки, посему я стандартами аминокислот пока еще не обзаводился и не сильно-то хотел, но, при сильной необходимости, конечно обзаведусь. Понятно, отлаживая сенсор я могу в его кювету наливать чистый раствор того, что хочется детектировать, но мне это уже не сильно интересно, ибо видеть получается многое, а вот со скоростью и низкой концентрацией у моего сенсора пока проблемы, посему хочется иметь несколько простых и повторяемых экспериментов со смесями пептидов, которые достаточно хорошо разваливаются на разные пики, и смотреть как в реальности это все происходит. Идеально было бы конечно малой кровью (то есть малым бюджетом и затратами по времени) подобрать хороший набор на 5-10-20 экспериментов смесей актуальных пептидов и/или белков и чтоб доставаемо было, и колонки тоже доставаемы, и элюенты, и чтобы можно было много раз потренироваться и таки отладить математику в моем сенсоре. Спасибо всем огромное, что советуете!!! |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 3 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
