| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
RP-HPLC амино кислот >>>
|
 |
| Автор | Тема: RP-HPLC амино кислот |
|
NK Пользователь Ранг: 3 |
 14.11.2005 // 4:54:15
Редактировано 1 раз(а) Господа аналитики! Наверняка многие имеют опыт хроматографирования аминокислот в градиентном и/или изократическом режимах с использованием буферных систем или динамического модифицирования подвижной фазы (вода/ацетнонитрил/метанол). Подскажите, пожалуйста, систему (элюент), в которой будут удовлетворительно разделяться аминокислоты (недериватизированные) на аналитической колонке с С18 в изократике. Заранее благодарен. |
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
14.11.2005 // 9:54:21
Сколько и каких аминокислот нужно разделить? Если все 20 основных, то могу огорчить - в изократе, на обращенке, без дериватизации, с использованием обычных колонок это сделать - просто нереально, даже с динамической модификацией хроматографической системы. |
|
NK Пользователь Ранг: 3 |
14.11.2005 // 10:29:08
Нужно разделить смесь стандартов 6 аминокислот (лейцин, гистидин, валин, серин, глицин и аланин) |
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
14.11.2005 // 10:40:51
Редактировано 1 раз(а) Насколько я знаю, из приведенных аминокислот практически ни одна, за исключением гистидина не имеет боле-менее серьезного поглощения в УФ свете (кроме неспецифического поглощения при 200-210 нм), поэтому обычно прибегают к дериватизации. В частности, получение фенилтиогидантоинов аминокислот. Эти ФТГ в изократике более-менее сносно делятся с помощью ПФ (разработана итальянцами, но координаты уже дать не могу - давненько это было). Состав : 0,05 М ацетат натрия (рН=5,0), 30 % ацетонитрила + 1 мл Дихлорэтана + 1 мл Этилацетата (все из расчета на 1 литр ПФ). Детектирование при 254 нм. А без дериватизации можно попробовать в реверсном варианте с добавлением тетрабутиламмония бромида при рН близким к пределу выносливости обычной обращенки (7-8) при 210 - 220 нм. Но в этом случае пики аминокислот будут отрицательными. |
|
NK Пользователь Ранг: 3 |
14.11.2005 // 16:25:00
Редактировано 1 раз(а) Большое спасибо всем откликнувшимся! Может быть посоветуете ОФ систему для разделения вышеприведенных аминокислот в градиенте с использованием буфера. Мне нужно разделить именно недериватизованные аминокислоты. Имеется аналитическая колонка с С18 и спектофотометрический детектор. Есть подозрение, что эти аминокислоты будут элиюроваться не одним, а несколькими пиками (ионные формы и молекулярная форма), если готовить водные растворы. Подскажите, в чем лучше растворить стандарты аминокислот чтобы избежать этого явления. |
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
14.11.2005 // 18:48:44
Есть два варианта обращенки, но лучше делать на силикагеле или аминофазе. Если обращенка, то 1. Можно сделать с обычным додецилсульфатом с УФ 210нм, если их довольно много. 5мМ додецилсульфата-ацетонитрил гдето в отношении 70:30. Я так делал искусственные смеси аминокислот в таблетках - отлично делится. 2. "Крутой" вариат. Для разделения недериватизированных аминокислот в обращенке есть специальные ион-парный реагент - перфторинованная бутановая, кажется, кислота. Ацетонитрила, вроде бы, не надо вообще. рН надо контролировать (есть статьи в Журле Хроматографии А) 3. Самое лучшее - взять силикагель или аминофазу, и делить их в гидрофильном режиме. Элюент - примерно ацетонитрил-вода 80:20. Я так тоже одно время амикислоты и короткие пептиды делал. Ну все. Кажется. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 5 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
