| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
определение активности пероксидазы >>>
|
 |
| Автор | Тема: определение активности пероксидазы | ||
|
елена 2012 Пользователь Ранг: 18 |
 06.01.2013 // 13:26:35
Хочу определить активность гваякол-зависимой пероксидазы в растениях. Для определения использую КФК-3. Необходимо снять 5–10 точек. Таким же способом измеряют вторую опытную кювету. Строят график зависимости оптической плотности D440 от времени t. На графике находят линейный участок и вычисляют скорость изменения оптической плотности D’440 = (D4402 – D4401) / (t2 – t1). (D’440 вычисляется по численным значениям, а не измеряется по графику!) Как строить этот график?В Excel?Нужен строго линейный участок? для примера я получала следующие цифры: 0,5 мин - 0,064 1 мин - 0,211 2 мин - 0,496 2,5 мин - 0,674 3 - 0,911 4 - 2,257 5 - 1,053 И на 5-й минуте все вставало колом и не менялось значение 1,053.Это нормально, что значение пошло вниз? |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Botrytis Пользователь Ранг: 186 |
06.01.2013 // 17:27:29
А методику попроще искать не пробовали? Я, например, на КФК активность перокидазы по Бояркину с безидином определял, хорошая дуракоустойчивая. В этом же пособии спектрофотометрическое с гваяколом, не пробовал но думаю тоже хорошая. Пишите если надо. |
||
|
елена 2012 Пользователь Ранг: 18 |
06.01.2013 // 18:16:43
Да, надо!Если не сложно отправьте методику на zorinaelena88{coбaчkа}mail.ru Буду рада любой информации. |
||
|
kump Пользователь Ранг: 3273 |
07.01.2013 // 9:59:31
Бензидин - канцероген. Говорят, сильный. |
||
|
Botrytis Пользователь Ранг: 186 |
07.01.2013 // 14:00:54
Я и не призываю им пользоваться, просто у меня его с килограмм лежит, а активность пероксидазы от случая к случаю определяю, технику безопасности соблюдаю. Сейчас вон бензойку к канцерогенам приписали, а в любом майонезе это добро лежит, а уважаемый? Но мы от темы уклонились, вот ссылка на файл, так удобнее может еще кому-то надо: |
||
|
kump Пользователь Ранг: 3273 |
07.01.2013 // 18:50:29
Бензойку? Да вы чо! Не слышал. А где написано? |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Botrytis Пользователь Ранг: 186 |
07.01.2013 // 19:46:49
В Гугле. |
||
|
елена 2012 Пользователь Ранг: 18 |
 08.01.2013 // 16:36:05
Спасибо ОГРОМНОЕ!!!! Еще вопрос относительно КФК (на нем приходится мерить т.к. ФЭК сломался). Вы измеряете изменение оптической плотности (она обозначена буквой Е на нем). А в методе по Бояркину она (под D) обозначена постоянной величиной 0,25. Как быть в этом случае с расчетом активности пероксидазы? Какая формула? И с уменьшением оптической плотности на 5-й минуте не понятно, так и должно быть? Я тоже работала с бензидином раньше, а теперь ФЭКа нет, и бензидина нет, зато есть гваякол, приходится извращаться и изобретать велосипед, т.к. на КФК раньше никогда не работала и в инструкции к нему по делу написано мало |
||
|
Botrytis Пользователь Ранг: 186 |
08.01.2013 // 17:50:59
Редактировано 1 раз(а) Не надо ничего изобретать. Длина волны для гваякола - 470 нм. В одну кювету КФК толщиной 2 см наливаете все как в методике: 2 мл вытяжки, 2 мл буфера и 2 мл раствора гваякола + 2мл дистиллированной воды. Это контроль, на КФК оптическую плотность этой кюветы обнуляете. В Другую кювету: 2 мл вытяжки, 2 мл буфера и 2 мл раствора гваякола + 2мл Н2О2. С последней каплей (лучше пользоваться автоматической пипеткой) включаем секундомер и когда оптическая плотность опытной кюветы достигнет 0.250, выключаем секундомер. Оптимально если это происходит за 10-40 сек. Если быстрее то надо разбавлять вытяжку. Затем полученное подставляете в формулу и таким образом результаты отражают изменение оптической плотности за 1 сек на 1 г сырого веса ткани. |
||
|
елена 2012 Пользователь Ранг: 18 |
08.01.2013 // 19:34:38
Спасибо.Очень вам признательна.Теперь вроде бы все встало на свои места. Решила сразу на начальном этапе разобраться, как говориться лучше день потерять, потом за час долететь! |
||
|
Енька Пользователь Ранг: 1 |
08.04.2021 // 6:56:21
Редактировано 1 раз(а) Добрый день. Также возникла проблема с определением активности пероксидазы. Правильно я понимаю, что при использовании бензидина расчет активности фермента идет по времени? Когда в опытную кювету добавляем перекись включаем секундомер и фиксируем время, когда оптическая плотность достигнет 0,250? И, соответственно, в формуле учитываем это время + вес ткани и степень разведения... А если гваякол, то там нужно проводить измерения оптической плотности через каждые 20 сек до какого момента? И главный вопрос, если в качестве субстрата используем бензидин, а методика снятия отчетов как по гваяколу это в корне неверно? |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 10 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
