| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Отмывка обращенно-фазной хроматографической колонки С18 >>>
|
 |
| Автор | Тема: Отмывка обращенно-фазной хроматографической колонки С18 |
|
Dionisii Пользователь Ранг: 377 |
 28.01.2010 // 10:14:05
Братцы-химики, подскажите, пожалуйста, какой-нибудь приличный метод отмывки колонки после "биологии". Насколько мне известно - метод включает в себя ряд промывок растворами разной элюирующей силы. Причем, как мне известно, промывать надо перевернув колонку задом-наперед. Это все, что я знаю. Мне бы хотелось знать: 1)продолжительность промывок каждым элюентом, 2)их последовательность. Кстати, про "задом-наперед" это и сейчас актуально, или это архаика? |
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|
DSP007 VIP Member Ранг: 2228 |
 28.01.2010 // 10:34:44
Если биология в основном жиры с липидами - меон->i-пропанол ( снизить расход, бо вязкий) -( изопропанол +метиленхлорид)- изопропанол-меон- фаза хранения. Если биология - низкомолекулярные белки / протеины/глобулины - водой до опупения при температуре не ниже 30 и не выше 50 С. Если биология высокомолекулярные белки то увы. Впрочем они либо проскакивают колонку насквозь без задержки , либо абсорбируются на фильтре и первых мм фазы колонки. На будущее - приучитесь избавляться от вм белков в пробе , благо способов немерено - от банальной вредной ТХУ до замудренной переэкстракцией через органику. Обычным же методом для низкомолекулярных ( М<1000) является сорбция пробы на твердофазных патронах, которые осеновная масса белков проскакивает по эксклюзионному принципу. |
|
Dionisii Пользователь Ранг: 377 |
28.01.2010 // 11:09:29
Спасибо, отмываем первое, белков нет. А продолжительность отмывки каждым элюентом?, а как насчет "задом-наперед"? |
|
DSP007 VIP Member Ранг: 2228 |
28.01.2010 // 11:19:41
Задом наперед всяко лучше. Переходные- 2-3 объема колонки , промывочный- 20-30 объемов. Метиленхлорид моет сильно, но имеет плохой нюанс- микропримеси соляной кислоты, срок службы колонки сокращается. Можно заменять гексаном, но он моет значительно хуже . Изопропанол или любой другой высший спирт - имеет высокую вязкость. Оптимально мыть при температуре как можно выше- во первых при высокой температуре любые жиры расплавляются и легко растворяются в изопропаноле , во вторых у изопропанола вязкость ( а зачит и давление ) падает на треть на каждые 10С+. При 60-70 С можно качать по нескольку милилитров в минуту, а при 20 С уже на 0,5 мл давление зашкаливает. |
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
28.01.2010 // 13:06:17
Редактировано 1 раз(а) От липидов поприобуйте метил-третбутиловый эфир (MTBE). Он не вязкий, большинство липидов растворет замечательно и к тому же неполярный, т.е. с обратной фазы хорошо снимает даже триацилглицериды. Переходите из водных элюентов через метанол или ацетонитрил, без разницы. Извините за опечатки, какие то непонятки с кодировкой. Потом исправлю когда смогу редактировать текст |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 4 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
