Повышение чувствительности метода определения концентрации малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты

Тезисы VII конференции "Аналитика Сибири и Дальнего Востока - 2004" »
Устные доклады » Секция 5. Анализ биологических, медицинских и фармацевтических объектов » ...

Повышение чувствительности метода определения концентрации малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты

Рогожин В.В., Курилюк Т.Т.

Якутская государственная сельскохозяйственная академия,
677007, г. Якутск, ул. Красильникова, 15, E-mail: vrogozhinmail.ru

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в биохимических лабораторных методах исследования. Цель изобретения - повышение чувствительности и точности определения малонового диальдегида в биологическом материале. Поставленная цель достигается тем, что для анализа используется минимальное количество сыворотки крови или гомогената (0,2-0,5 мл), растворение ТБК и инкубацию образца проводят в присутствии тритона Х-100, смесь перемешивают с постоянной частотой колебаний, реакцию останавливают дигидрокверцетином; перед определением оптической плотности образца добавляется трилон Б (для стабилизации окраски) и смесь этанола с хлороформом в соотношении (7:3). В основе метода лежит реакция между малоновым диальдегидом (МДА) и тиобарбитуровой кислотой, которая при высокой температуре и кислом значении рН протекает с образованием окрашенного триметинового комплекса, содержащего одну молекулу МДА и две молекулы тиобарбитуровой кислоты. Максимум поглощения комплекса приходится на 532 нм.

Определение скорости перекисного окисления липидов в отсутствие прооксиданта проводили в следующей последовательности. 0,5 мл сыворотки или гомогената ткани инкубировали 30 мин при температуре 40^оС, при постоянном перемешивании с частотой 120 качаний в минуту. Реакцию останавливали 0,2 мл 3 мМ раствором дигидрокверцетина. Затем к исследуемому образцу последовательно добавляли 0,5 мл 1% раствора тритона Х-100, 0,2 мл 0,6 М раствор НСl и 0,8 мл 0,06 М рабочий раствор ТБК. Смесь нагревали в кипящей водяной бане в течение 10 мин. Охлаждение проводили при температуре 15^оС в течение 30 мин. Для стабилизации окраски добавляли 0,2 мл 5 мМ раствор трилона Б и 5-10 мл смеси этанола с хлороформом в соотношении (7:3). Оптическую плотность измеряли при 532 нм. Контролем служила пробирка в которую добавляли все эти же растворы, только вместо сыворотки или гомогената добавляли бидистиллированную воду. В расчетах концентрации МДА использовали молярный коэффициент поглощения 156 мМ^-1см^-1.