Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Методика определения фосфолипидов в желтке яйца >>>

  Ответов в этой теме: 6

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Методика определения фосфолипидов в желтке яйца
Евген
Пользователь
Ранг: 1

30.11.2009 // 17:02:35     
Уважаемые специалисты, обращаюсь с просьбой помочь в поиске методики для определения фракций фосфолипидов в желтке птичьего яйца
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
sinthetic
Пользователь
Ранг: 3367


01.12.2009 // 7:35:35     
По-моему, есть в: Кейтс "Техника липидологии". Поищите её в сети.
ктонибудь
Пользователь
Ранг: 7


06.12.2009 // 21:53:46     
Выделяете липиды по Фолчу, готовите 1% раствор в хлороформе, наносите образец на пластину с силикагелем (ТСХ), разгоняете в камере в системе растворителей, сушите, проявляете в парах иода, соскребаете пятна фракций в отдельные пробирки (для идентификации ФЛ желательны стандарты), добавляете хлорную кислоту, сжигаете в ней (на плитке), затем проводите определение содержания неорганического фосфора (кипятите на водяной бане с раствором хлорной кислоты, молибдата аммония и аскорбинки). Затем - спектрофотометр. Соотношение неорганического фосфора в пятнах на хроматограмме - соотношение фракций ФЛ. От желтка до конкретных цифр - примерно неделя работы. Подробности изложены в многочисленных статьях. Если будут вопросы - пишите на эл. почту.
sinthetic
Пользователь
Ранг: 3367


07.12.2009 // 0:27:09     
Для полуколичественного определения достаточно конц. сернягой хроматограмму опрыскать. На силикагеле с фронтом там уползают нейтральные, ниже ФХ, ещё ниже ФЭА, у старта всякая липопротеиновая шняга.

Систему, АФАИР, мы юзали хлороформ-метанол. Соотношение подзабыл, но его легко подобрать. 5:1, что ли?
Garry
VIP Member
Ранг: 1075


07.12.2009 // 14:29:05     
Редактировано 1 раз(а)


Евген пишет:
Уважаемые специалисты, обращаюсь с просьбой помочь в поиске методики для определения фракций фосфолипидов в желтке птичьего яйца
Не проблема. Я разрабатывал методологию для легочного сурфактанта с использованием количественной ТСХ. По экстракции фосфолипидов см. "Практикум по биохимии" М.,МГУ 1989, под редакцией Северина С.Е. Там все подробненько написано как извлечь. А для анализа понадобится ТСХ пластинка, 3 % раствор борной кислоты спиртовой, 10 % раствор фосфорно-молибденовой кислоты, хлороформ, метанол и 25 % аммиак, стандарты фосфолипидов Sigma, только извлеченные из яйца (from Egg)! Ну ... и компьютер, сканер и программа обработки ТСХ пластин.
Пластинки моете в метаноле и одновременно импрегнируете борной кислотой. Короче, в кювету помещаете пластинку, заливаете 3 % раствором борной кислоты спиртовым (лучше метанольным, но можно и этанольным), выдерживаете минут 5 помешивая раствор. Затем вынимаете и в сушильный шкаф на 1 час при 105-110 С для активации. В ТСХ камеру заливаете смесь хлороформ:метанол: 25 % аммиак в соотношении (65:35:8) и насыщаете камеру 1 час. На подготовленную и активированную пластинку наносите растворы стандартов и растворы проб из расчета, чтобы в нанесенной точке количество отдельного фосфолипида не превышало 10 мкг (иначе линейности не увидите, а будет Кубелка-Мунк). Далее хроматографируете и после тщательного высушивания окунаете на пару секунд пластинку в раствор (этанольный) 10 % фосфорно-молибденовой кислоты. Избыток раствора удаляете фильтровалкой и греете в сушильном шкафу минут 10 при 100-110 С. Ну а далее сканируете и обрабатываете соответствующим ПО.

Порядок следования фракций легко определите по стандартам, но приблизительно следующий снизу-вверх фосфатидилинозин/серин - сфингомиелин - лецитин-лизолецитин-фосфатидилглицерин(кардиолипин)-кефалин. Ну еще в промежутках между основными фракциями могут быть из лизоформы.
Шуша
Пользователь
Ранг: 2522


07.12.2009 // 16:47:22     

ктонибудь пишет:
...Если будут вопросы - пишите на эл. почту.

Ага, по адресу "На деревню - дедушке(собака)mail.ru"
У остальных прошу прощения за оффтоп, но не смог удержаться.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
«НИ и ПИ экологии города», ЗАО «НИ и ПИ экологии города», ЗАО
Профессиональная организация, выполняющая полный комплекс изыскательских, проектных и научно-исследовательских работ в области градостроительства, территориального планирования, строительства промышленных и инженерных объектов, а так же специализированный экспертно-базовый центр, выполняющий широкий спектр лабораторных исследований.
ктонибудь
Пользователь
Ранг: 7


09.12.2009 // 20:35:06     
да, правда, оплошала. Адрес shevchenko{coбaчkа}ib.komisc.ru

  Ответов в этой теме: 6

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты