Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ: Метотрексат в плазме крови >>>

  Ответов в этой теме: 13
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: ВЭЖХ: Метотрексат в плазме крови
KseniyaZ
Пользователь
Ранг: 5

10.11.2008 // 13:36:39     
Добрый день! Я "новичок" на форуме. Почитала вопросы и ответы, понравилось, все очень дельно и ни один из вопросов не остается без внимания!!
Я тоже с проблемкой. Оч. недавно начала заниматься ВЭЖХ анализом медпрепаратов в плазме, до этого делала анализ в растворах и проблемы, которые возникали, решались проще.
Если кто-то может подсказать... Пытаемся количественно оценить Метотрексат в плазме пациентов, которые принимали этот препарат. Пробы (кровь) отбирали через определенное количество времени у пациентов. Короче, в плазме получаются заниженные концентрации Метотрексата, хотя стандарт замечательно "выходит" и дает симметричный пик, калибровка 0,998! Белок осаждаем трихлоруксусной кислотой в этаноле. ПФ: буфер+TRIS рН 5,7 : МеОН+МеСN 85:15, Kromasil.
При других методиках пик не выходит вообще.
Подозрение, что не правильно выделяем из пробы. Может кто сталкивался с этим препаратом? Чего не так делаем?
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
G.Baram
VIP Member
Ранг: 211


10.11.2008 // 13:47:26     
Редактировано 1 раз(а)

www.econova.ru/applications/publication/publication.php?set=dissertation
Здесь лежит кандидатская диссертация по определению лекарств (в том числе и метотрексата) в крови. В ней есть все необходимые Вам методики.
Полезна будет и глава в книге (ссылка 69) на сайте: www.econova.ru/applications/publication/publication.php?set=clause
KseniyaZ
Пользователь
Ранг: 5


10.11.2008 // 15:04:29     

G.Baram пишет:
www.econova.ru/applications/publication/publication.php?set=dissertation
Здесь лежит кандидатская диссертация по определению лекарств (в том числе и метотрексата) в крови. В ней есть все необходимые Вам методики.
Полезна будет и глава в книге (ссылка 69) на сайте: www.econova.ru/applications/publication/publication.php?set=clause

Спасибо, уважаемый! Эту диссертацию мы уже наизусть выучили, банально, но нет на нее перхлората лития и никто нам его не купит! Спасибо за помощь большое!
tired
Пользователь
Ранг: 110


10.11.2008 // 19:05:19     

KseniyaZ пишет:
Добрый день! Я "новичок" на форуме. Почитала вопросы и ответы, понравилось, все очень дельно и ни один из вопросов не остается без внимания!!
Я тоже с проблемкой. Оч. недавно начала заниматься ВЭЖХ анализом медпрепаратов в плазме, до этого делала анализ в растворах и проблемы, которые возникали, решались проще.
Если кто-то может подсказать... Пытаемся количественно оценить Метотрексат в плазме пациентов, которые принимали этот препарат. Пробы (кровь) отбирали через определенное количество времени у пациентов. Короче, в плазме получаются заниженные концентрации Метотрексата, хотя стандарт замечательно "выходит" и дает симметричный пик, калибровка 0,998! Белок осаждаем трихлоруксусной кислотой в этаноле. ПФ: буфер+TRIS рН 5,7 : МеОН+МеСN 85:15, Kromasil.
При других методиках пик не выходит вообще.
Подозрение, что не правильно выделяем из пробы. Может кто сталкивался с этим препаратом? Чего не так делаем?

_________________
Сталкивался с подобной проблемой при анализе препаратов крови. Попробуйте следующее:
1. Использовать свежеприготовленные пробы (стандарта и препарата).
2. Попробуйте проанализировать содержание метотрексата в белковом осадке.
3. С чего вы вообще взяли что содержание мт заниженное?
4. Не могли ли вы "потерять" мт при получении плазмы?
KseniyaZ
Пользователь
Ранг: 5


13.11.2008 // 16:32:28     
Спасибо, советом воспользовались!
Плазму готовим не мы, ее уже присылают на анализ.
У нас в расоряжении только ВЭЖХ. Как можно проверить препарат в осажденном белке?
О заниженных результатах говорит шеф и не принемает результат!
KseniyaZ
Пользователь
Ранг: 5


13.11.2008 // 16:34:06     
Простите, может глупость спрошу... Есть ли принципиальное отличие пробоподготовок сыворотки и плазмы и условий анализа ВЭЖХ?
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Низкотемпературная лабораторная электропечь (сушильный шкаф) SNOL 220/300 Низкотемпературная лабораторная электропечь (сушильный шкаф) SNOL 220/300
Камерные электропечи нового поколения предназначены для просушки различных материалов, проведения аналитических работ в воздушной среде в стационарных условиях при температуре от 50 до 300°С.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
aleks_s
Пользователь
Ранг: 24


13.11.2008 // 18:07:46     
Так вы и градуировочные стандарты готовьте в плазме, матрица должна совпадать...
tired
Пользователь
Ранг: 110


13.11.2008 // 20:14:56     

KseniyaZ пишет:
Простите, может глупость спрошу... Есть ли принципиальное отличие пробоподготовок сыворотки и плазмы и условий анализа ВЭЖХ?
При получении плазмы из крови пациентов ее отделяют скорее всего центрифугированием (осаждаются эритроциты). Вещество в крови (в вашем случае мт) могут быть связаны с эритроцитом или с альбумином. Ваше методика оправдана только в том случае если метотрексат связан с альбумином крови, иначе он осаждается с эритроцитами, но некоторое его количество все же присутствует в плазме - отсюда вы можете получать заниженные результаты.
Второй вариант, если вещество связано с альбумином. В этом случае при осаждении белка (пробоподготовки раствора) вы можете осаждать и мт вместе с ним (также как и в первом случае).
Вот такие пирожки с котятами
Но, что самое интересное, возможно (и скорее всего) мт переносится и эритроцитами и в плазме крови (почитайте литературу). и, еще раз повторю возможно, вы теряете мт и на стадии получения плазмы и на стадии получения пробы из плазмы. Но для выводов необходимо знать насколько занижены у Вас результаты.
Для получения сведений о мт в осадке: проведите многократную экстракцию избирательным для мт экстрагентом. Затем концентрируйте его, разбавляйте элюентом и в колонку.
Но сначала поробуйте напрямую поработать не с плазмой - с кровью... При осаждении белка вашим раствором будет наблюдаться гемолиз эритроцитов - далее центрифугируйте и в колонку - посмотрите, изменятся ли результаты при таком раскладе.
Далее вопросы:
1. У Вас получаются симметричные пики?
2. Как рассчитываете концентрацию?
tired
Пользователь
Ранг: 110


13.11.2008 // 20:39:40     

aleks_s пишет:
Так вы и градуировочные стандарты готовьте в плазме, матрица должна совпадать...
гы... стандарты в биоматериалах? свежую плазму? начальство жаба задушит)))) а консервированную использовать нельзя - цитрат там. может помешать. лучше изотонический раствор или просто воду на крайний случай - будет то же самое.
aleks_s
Пользователь
Ранг: 24


13.11.2008 // 20:58:15     

KseniyaZ пишет:
Спасибо, советом воспользовались!
Плазму готовим не мы, ее уже присылают на анализ.
У нас в расоряжении только ВЭЖХ. Как можно проверить препарат в осажденном белке?
О заниженных результатах говорит шеф и не принемает результат!


Готовя стандарты в плазме, вы и увидите есть ли препарат в осажденном белке, сравнив с вашими предыдущими калибровками и таким образом подтвердите результаты.
tired
Пользователь
Ранг: 110


14.11.2008 // 7:53:10     

aleks_s пишет:
Готовя стандарты в плазме, вы и увидите есть ли препарат в осажденном белке, сравнив с вашими предыдущими калибровками и таким образом подтвердите результаты.
Вы предполагаете, что при добавлении стандарта мт напрямую в плазму вы сможете смоделировать все связи с белком? а затем сравнить концентрацию стандарта в обычном растворе и концентрацию стандарта в плазме? Ввозможно, и стоит попробовать, НО пробы крови пациентов содержат уже не сам мт, а его метаболиты, и предсказать связывание метаболитов с плазмой вряд ли возможно... (сейчас пошел смотреть фармакокинетику мт - как что-то найду - отпишусь)

  Ответов в этой теме: 13
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты