Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Почему пики не зависят от концентрации? ВЭЖХ >>>

  Ответов в этой теме: 14
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Почему пики не зависят от концентрации? ВЭЖХ
svet2004
Пользователь
Ранг: 32

14.08.2008 // 21:04:31     
Надо провести анализ проб с кетоконазолом. Удалось подобрать подвижную фазу где пики появились, приступила к градуировке - и столкнулась с такой проблемой:
первый пик довольно большой, даже если концентрация у этого раствора самая маленькая, следующий пик значительно меньше, а каждый следующий пик меньше или равен предыдущему.
Я подумала что препарат абсорбируется на стекле- но при анализе из эпендорфов все тоже самое, пыталась менять длину волны и пробовала растворять в-во в метаноле, подвижной фазе, варьировать количество воды - но с точки мертвой не сдвинулвсь.
Я теперь даже не знаю в какую сторону копать. Знающие люди, подскажите пожалуйста!
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Волгин
VIP Member
Ранг: 1326


14.08.2008 // 21:20:13     
А нельзя ли поподробнее? Колонка (сорбент, размеры зерна и колонки), прибор, состав подвижной фазы и условия проведения анализа, время выхода компонентов пробы. Анализировали стандартный образец , субстанцию или сразу приступили к анализу лекформы, в последнем случае какая лекформа: таблетки, крем или шампунь и какова пробоподготовка?
svet2004
Пользователь
Ранг: 32


14.08.2008 // 21:31:43     
Редактировано 2 раз(а)

Колонка Luna C18 (2), 5 мкм, 4.6 х 150 мм (Phenomenex). хроматограф Knauer. Подвижная фаза - фосфатный буфер с рН=6/ацетонитрил=50/50, скорость потока 1 мл/мин, температура комнатная - сегодня было почти 30 градусов по цельсию. Время выхода 7,6 минут.
Задача определить в плазме крови. Но ничего не выходит еще на этапе работы со стандартным веществом.

trozen
Пользователь
Ранг: 216


15.08.2008 // 0:49:18     
похоже, что то, что вы видите - вовсе не кетоконазол.
подробности о стандартном веществе и пробоподготовке и вправду не помешали бы..
Slawa
Пользователь
Ранг: 323


15.08.2008 // 1:02:04     
Редактировано 1 раз(а)

Попробуйте сдвинуть значение pH буфера до 5.0, правда при этом возможно надо будет уменьшить содержание ацетонитрила.
Илья226
Пользователь
Ранг: 354


15.08.2008 // 6:48:13     
Редактировано 1 раз(а)

кетоконазол- цис-1-Ацетил-4-[4[[2-(2,4-дихлорфенил)-2-(1H-имидазол-1-илметил)-1,3- диоксолан-4-ил]метокси]фенил]пиперазин...выпускается в таблетках.
Растворимость не смотрели? УФ спектр? Если вы готовите стандарт из таблеток то либо растворяете какое то от вспомогательных веществ, либо из-за высокой липофильности он садится на колонке и не выходит. В общем расскажите ка подробнее про стандарт...из чего готовили...как испытывали и т.д. и т.п.

Кстати при последующей промывке колонки 100% ацетонитрилом никаких пиков не вылазит? 50% по моему маловато.....прогоните градиентом от 0 до 100 с последующей изократикой ацетонитрилом и посмотрите.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Экоаналитика, Эколого-аналитическая ассоциация Экоаналитика, Эколого-аналитическая ассоциация
Ассоциация является независимой творческой организацией, объединяющей на добровольной основе более 40 организаций России из различных областей науки, её практических приложений и системы образования. Ассоциация располагает собственной научной и производственной базой. Производит более 100 наименований стандартных образцов и аттестованных растворов.
svet2004
Пользователь
Ранг: 32


15.08.2008 // 10:33:26     

Илья226 пишет:
В общем расскажите ка подробнее про стандарт...из чего готовили...как испытывали и т.д. и т.п.

Кстати при последующей промывке колонки 100% ацетонитрилом никаких пиков не вылазит? 50% по моему маловато.....прогоните градиентом от 0 до 100 с последующей изократикой ацетонитрилом и посмотрите.

Стандарты мне привозят в эпендорфах: беленький порошок в воде не растворим. Прилично растворяется в метаноле, удалось растворить в смеси метанол-вода(50/50), хорошо растворяется в подвижной фазе. Меряла спектры всех указанных растворов - есть пик на 208-209 нм, плато на 240.
За совет спасибо - сейчас буду пробовать
Илья226
Пользователь
Ранг: 354


15.08.2008 // 11:32:38     

svet2004 пишет:
[ Стандарты мне привозят в эпендорфах: беленький порошок в воде не растворим. Прилично растворяется в метаноле, удалось растворить в смеси метанол-вода(50/50), хорошо растворяется в подвижной фазе. Меряла спектры всех указанных растворов - есть пик на 208-209 нм, плато на 240.
За совет спасибо - сейчас буду пробовать


Фазы с трифторуксусной кислотой не пробовали? Элюнет А- 0,1% ТФУ элюент Б- ацетонитрил. Спектры меряли как? Приготовленных стандартов на спектрофотометре или выходящего пика на жидкостнике? Со справочными данными совпадает? Удельный показатель большой? Вообще странно...система сопряженная, несколько гетероциклов...должен повыраженее спектр наблюдаться.
svet2004
Пользователь
Ранг: 32


15.08.2008 // 11:51:44     

Илья226 пишет:
[Фазы с трифторуксусной кислотой не пробовали? Элюнет А- 0,1% ТФУ элюент Б- ацетонитрил. Спектры меряли как? Приготовленных стандартов на спектрофотометре или выходящего пика на жидкостнике? Со справочными данными совпадает? Удельный показатель большой? Вообще странно...система сопряженная, несколько гетероциклов...должен повыраженее спектр наблюдаться.
пробовали фазу с ТФУ, правда там еще ДДС натрия был...
мерили спектры стандартов на спектрофотометре.
А не дадите ссылочку на источник, по которому вы интересуетесь про ТФУ- я вот ни в одной статье фаз с нею не видела...
Vobla
Пользователь
Ранг: 2


15.08.2008 // 16:09:17     
Редактировано 1 раз(а)


trozen пишет:
похоже, что то, что вы видите - вовсе не кетоконазол.
подробности о стандартном веществе и пробоподготовке и вправду не помешали бы..

______________________________________________________
Скорее всего кетоконазол вылетел с колонки сразу.
Рекомендую для начала градиент от 5% ACN в воде до 70%.
рН можно довести фосфорной к-той до 3,5; детектор - для начала 210, потом 254 нм, петля - 10-20 мкл.
Для поиска в сыворотке, прикиньте возможные конц. этого товара в крови, его экстинцию, возможный объем петли. Судя по всему, УФ-детектор с его невысокой чуствительностью Вам не пригодится.
Волгин
VIP Member
Ранг: 1326


15.08.2008 // 16:46:54     
Редактировано 1 раз(а)


svet2004 пишет:
... пробовали фазу с ТФУ, правда там еще ДДС натрия был...

И раз уж Вы через колонку додецилсульфат прокачали, снимите ее и используйте ТОЛЬКО для подвижных фаз его (ДДС) содержащих, поскольку он теперь лет 100 с нее смываться будет, и в течение всего этого периода у Вас могут плыть времена удерживания. А для элюентов, НЕ содержащих ионпарных реагентов, применяйте отдельную колонку.
PS Кстати, наберите в Гугле " ketoconazole HPLC " и вам сразу столько ссылок вывалится... Например, эта: www.informaworld.com/smpp/content~db=all~content=a758164335~tab=content

  Ответов в этой теме: 14
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты