Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

денситометрия >>>

  Ответов в этой теме: 2

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: денситометрия
olgarozen
Пользователь
Ранг: 1

07.03.2008 // 17:34:29     
Здравствуйте!
У меня проблема с количественнм определением содержания липидов денситометрией. Я пользуюсь денситометром Сорбфил (Краснодар). По этому методу определяется только относительное содержание. но не абсолютное. Как можно определять абсолютное содержание вещества (например, липида) после ТСХ?
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
DSP007
VIP Member
Ранг: 2228


07.03.2008 // 23:17:41     
Редактировано 1 раз(а)

Все очень просто- делается разведение стандартного образца липида, точки разведений наносятся на пластинкув параллель с пробой, пластинка прогоняется, обрабатывается, денситометрируется, строится калибровочная кривая, определяется количество.
Есть одна маааленькая сложность- нужно иметь пяток миллиграмм искомого липида
Garry
VIP Member
Ранг: 1076


11.03.2008 // 14:13:38     
Я, например, разработал АНД для определения количества фосфолипидов в легочном сурфактанте методом ТСХ.
Необходимость именно в таком методе возникла не случайно. Во-первых, традиционный метод по неорганическому фосфору не катит, поскольку, "количество" фосфолипидов "легко" подкорректировать неорганическим фосфатом.
Во-вторых для такого стандартного метода необходимо было штук сорок ампул препарата немалой стоимости всего лишь для одной повторности.
И в-третьих - муторное и капризное дело - определение по минеральному фосфору.
"Богатые" хроматографисты предложили бы нечто типа ELSD или еще по-круче - тандемную ВЭЖХ масс-спектрометрию, но .... реалии жизни лежат довольно далеко от подобных технологий, да и стоимость анализа будет очень сильно кусаться.

Теперь по-теме. Не обязательно иметь точь-в-точь тот же липид для стандарта. Желательно, но не обязательно. Ведь проявление липидов неспецифично. То ли 10 % раствор фосфорно-молибденки в этаноле, то ли родамин Ж будет проявлять одинаково любой триглицерид и холестерин. С фосфолипидами есть некоторые различия. Единственно о чем нужно помнить, так это о линейном диапазоне Вашего метода проявления липидов. Стандартно, при визуализации веществ на ТСХ пластине линейность соблюдается более-менее в диапазоне нанесенных масс от 0,5 до 8 мкг в случае видимого света и несколько шире этот диапазон при флуоресцентной детекции.(от 3 нг до 20 мкг).
Поэтому для определения количества Вашего липида возьмите более подходящий и доступный (триглицерид, фосфолипид ...). Сделайте раствор с концентрацией 1000 мкг/мл, например в смеси Фолча. Нанесите на пластинку Ваш образец, помня, что нанесенная масса отдельного экземпляра липида не должна превышать 8 мкг (хотя в сумме липиды образца могут быть и более чем 8 мкг). Рядом с пробой нанесите не менее трех точек с раствором стандарта. Например, зная, что раствор с концентрацией 1000 мкг/мл - это 1 мкг в 1 мкл, наносят 2 мкл, 4 мкл, 8 мкл. В результате проявления Вашей пластинки Вы будете иметь треки с стандартными количествами триглицерида 2, 4 и 8 мкг и соответственно трек с пробой.
Обработайте пластинку с помощью Вашего "Сорбфил-Видеоденситометр", получите данные для калибровки (площадь стандартного пика - нанесенная масса). А далее на треке пробы отыщите нужный Вам пик искомого липида и подставьте площадь его пика в уравнение регрессии, которое Вы получите по калибровке. Таким образом, Вы узнаете количество в мкг искомого фосфолипида в том объеме, который Вы нанесли на пластинку. Затем, я думаю, особого труда не составит пересчитать на конечный объем экстракта.

  Ответов в этой теме: 2

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты