Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ анализ производного ГАМК - фенибута >>>

  Ответов в этой теме: 10

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: ВЭЖХ анализ производного ГАМК - фенибута
Мэриэн
Пользователь
Ранг: 5

07.02.2008 // 16:01:07     
Редактировано 1 раз(а)

Уважаемые коллеги, помогите, пожалуйста, советом.
Нам необходимо изучить фармакокинетику фенибута - производного гамма-аминомасляной кислоты на крысах. Мы столкнулись с проблемой его слабого удерживания на фазе С18. Мы работали на 0,05 м однозамещенном фосфатном буфере с различным процентом ацетонитрила, определение - УФ детектором. Сначала pH буфера сделали 4,4 и после прокола 10-15 биопроб пик ""уехал" на 2-3 минуту. Затем мы добавили к буферу ион-парный реагент - гептансульфонат натрия (0,12%) и подкислили буфер до pH 2,7 и при содержании ацетонитрила 20% нам удалось на 14-15 минуте получить пик хорошей высоты. Затем вещество хорошо удерживалось на колонке в течении 200 проб. Время удерживания уменьшилось только на минуту. А сегодня я вкалываю фенибут в плазме практически при том же давлении 6-6,2 МПа и получаю пик на 3 минуте, практически под биологией.
Подскажите, что делать? Увеличить концентрацию гептансульфоната? Еще сильнее закислить буфер? колонок других у нас нет - только обращенка.
Заранее спасибо.
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Илья226
Пользователь
Ранг: 354


08.02.2008 // 7:44:57     
А над дериватизацией не думали?....у него к тому же и спектра характерного нет...при 210 только детектируется.
Илья226
Пользователь
Ранг: 354


08.02.2008 // 7:46:34     
Редактировано 1 раз(а)

virtu
VIP Member
Ранг: 2133


08.02.2008 // 10:32:57     
Редактировано 1 раз(а)

А с элюентом все в норме, изменения состава не происходит? Вы случаем в мицеллярный режим "не залезли"? Или в "пограничный"?
Другой вариант: происходит сорбция каких-либо компонентов матрицы, которые не элюируется рабочим элюентом, это приводит к изменению удерживания вашего аналита (т.к. изменяются физико-хим. св-ва сорбента). Надо обратить внимание на матрицу, предколонку, проверьте после соответсвующей "промывки" ситуация изменяется или нет.
Еще здесь надо обратить внимание на сорбент, могут менятся его физико-хим. свойства, не ввиду сорбции компонентов матрицы, а ввиду его "лабильности" в данных условиях (рН элюента, состава элюента, время контакта рабочего элюента и сорбента и др.), здесь уже надо менять условия.
Мэриэн
Пользователь
Ранг: 5


08.02.2008 // 12:25:37     

Илья226 пишет:
А над дериватизацией не думали?....у него к тому же и спектра характерного нет...при 210 только детектируется.

Над дериватизацией уже, конечно, думали. К сожалению, у нас довольно жесткие временные рамки для выполнения работы, поэтому нет возможности перебирать варианты. Если у вас какие-то конкретные предложения по дериватизации, будем благодарны за предложение.
Мэриэн
Пользователь
Ранг: 5


08.02.2008 // 12:28:29     
Редактировано 1 раз(а)


virtu пишет:
А с элюентом все в норме, изменения состава не происходит? Вы случаем в мицеллярный режим "не залезли"? Или в "пограничный"?
Другой вариант: происходит сорбция каких-либо компонентов матрицы, которые не элюируется рабочим элюентом, это приводит к изменению удерживания вашего аналита (т.к. изменяются физико-хим. св-ва сорбента). Надо обратить внимание на матрицу, предколонку, проверьте после соответсвующей "промывки" ситуация изменяется или нет.
Еще здесь надо обратить внимание на сорбент, могут менятся его физико-хим. свойства, не ввиду сорбции компонентов матрицы, а ввиду его "лабильности" в данных условиях (рН элюента, состава элюента, время контакта рабочего элюента и сорбента и др.), здесь уже надо менять условия.

Мы в течение двух недель (100-150 биопроб) получаем стабильные результаты (время удерживания не меняется) при одинаковых условиях, давление вырастает на 1-2 МПа. Затем происходит внезапный "скачок" пика с 14-ой минуты на 3-4. Непонятно, почему такой резкий сдвиг при тех же самых условиях. Если Вы сталкивались с чем-то подобным, будем благодарны за совет.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Химлаборприбор, ОАО Химлаборприбор, ОАО
ОАО "Химлаборприбор" - российский производитель мерной, химико-лабораторной посуды, приборов и аппаратов из стекла.
Мэриэн
Пользователь
Ранг: 5


08.02.2008 // 12:28:30     
Редактировано 2 раз(а)


virtu пишет:
А с элюентом все в норме, изменения состава не происходит? Вы случаем в мицеллярный режим "не залезли"? Или в "пограничный"?
Другой вариант: происходит сорбция каких-либо компонентов матрицы, которые не элюируется рабочим элюентом, это приводит к изменению удерживания вашего аналита (т.к. изменяются физико-хи. св-ва сорбента). Надо обратить внимание на матрицу, предколонку, проверьте после соответсвующей "промывки" ситуация изменяется или нет.
Еще здесь надо обратить внимание на сорбент, могут менятся его физико-хим. свойства, не ввиду сорбции компонентов матрицы, а ввиду его "лабильности" в данных условиях (рН элюента, состава элюента, время контакта рабочего элюента и сорбента и др.), здесь уже надо менять условия.

Мы в течение двух недель (100-150 биопроб) получаем стабильные результаты (время удерживания не меняется) при одинаковых условиях. Затем происходит внезапный "скачок" пика с 14-ой
Мэриэн
Пользователь
Ранг: 5


08.02.2008 // 12:28:38     

virtu пишет:
А с элюентом все в норме, изменения состава не происходит? Вы случаем в мицеллярный режим "не залезли"? Или в "пограничный"?
Другой вариант: происходит сорбция каких-либо компонентов матрицы, которые не элюируется рабочим элюентом, это приводит к изменению удерживания вашего аналита (т.к. изменяются физико-хим. св-ва сорбента). Надо обратить внимание на матрицу, предколонку, проверьте после соответсвующей "промывки" ситуация изменяется или нет.
Еще здесь надо обратить внимание на сорбент, могут менятся его физико-хим. свойства, не ввиду сорбции компонентов матрицы, а ввиду его "лабильности" в данных условиях (рН элюента, состава элюента, время контакта рабочего элюента и сорбента и др.), здесь уже надо менять условия.


Мы в течение двух недель (100-150 биопроб) получаем стабильные результаты (время удерживания не меняется) при одинаковых условиях. Затем происходит внезапный "скачок" пика с 14-ой
Garry
VIP Member
Ранг: 1076


08.02.2008 // 15:04:27     
Попробуйте увеличить ионную силу буфера, например, до 0,1 М KH2PO4 рН =2,5 (я думаю будет достаточно), а в таких случаях как фенибут для получения более симметричных пиков иногда используют смесь ион-парных реагентов , например, (тетрабутил аммония гидросульфат и октилсульфонат натрия в соотношении 1:4). Варьировать удержание фенибута можно повышая ионную силу.
Лидия
VIP Member
Ранг: 436


08.02.2008 // 18:43:00     
Первое что приходит на ум- это ошибка при приготовлении элюента. Если эту возможность исключить, то можно посоветовать использовать в качестве буферной системы - формиатную. При данных значениях рН обеспечить буферную емкость будет легче.
virtu
VIP Member
Ранг: 2133


08.02.2008 // 23:23:10     
Редактировано 1 раз(а)

to Мэриэн:
Если честно сталкивался только один раз в банальном ОФ-режиме, сорбент Кромасил С18, элюент вода ацетонитрил, "изократ", аналит - бенз(а)пирен, тогда абс. время удерживания уменьшилось "скачком"(причем в ходе работы, он-лайн, на 6-ой вкол, на одном и том же элюенте, и при всех остальных "условно" постоянных параметрах) где-то на 25-30%, причем до этого все "стояло" удовлетворительно, кстати говоря, ситуация так и не пришла в исходное состояние. Это не фантастика, иллюзорно адекватное объяснение этому есть, но тогда я не стал искать корни этого проишествия.

На что обратить внимание я уже говорил, надо определить причину, а то может, потом будет то же самое. Адекватно "регенерируйте" сорбент! И потом поставьте рабочий элюент и уколитесь, если "чудеса" исчезнут, тогда понятно в каком направлении размышлять. И еще перед этим проверьте себя как следует! Нет ли где ошибки. Все бывает, отвлекся и вот тебе.

  Ответов в этой теме: 10

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты