| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Трипсинолиз >>>
|
 |
| Автор | Тема: Трипсинолиз |
|
Lola Пользователь Ранг: 5 |
 23.06.2007 // 11:10:11
Коллеги! Подскажите, пожалуйста, как ставить трипсинолиз! Меня интересует буфер. Важен ли его состав или все-таки все больше определяется рН? Я тут уже почитала, что на форумах писали про рН. Это я уже и в протоколах многих нашла. Но меня интересует сейчас, насколько важен состав. У меня буфер: 0.75М L-Arg, 0.1M Tris, 0.15M NaCl, 5mM GSH, 0.5mM GSSG, (либо вместо глутатионов цистеины - 5mM Cys, 1 mM Cys-Cys), 5mM EDTA.  рН 8.1 - 9.1 (2 разных буфера). Понимаю, что в буфере много аргинина. Но, может, кто-то в чем-то подобном ставил  Просто переводить в другой буфер как-то не хочется и пока не очень получается. А трипсинолиз хочу попробовать. Буду рада любым ответам/советам )
|
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
23.06.2007 // 18:33:09
А для чего буфер такой экзотический, если не секрет? Работать скорее всего будет, только две вещи мне (не знаю как трипсину) не нравятся: - SH / -SS- : если в трипсине правильную конфигурацию дисульфидных связей нарушить, он сдохнет. Я бы перед трипсинолизом весь -SH йодоацетамидом или винилпиридином забил для гарантии. Или померьте активность в этом буфере по хромогенному субстрату типа BAEE или TAME - тут народ транспептидацию наблюдал, а ведь аргинина у вас почти 1М. Вот с этим разбираться куда сложнее. Schaefer, H., Chamrad, D. C., Marcus, K., Reidegeld, K. A., Bluggel, M., and Meyer, H. E. (2005). Tryptic transpeptidation products observed in proteome analysis by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Proteomics 5, 846-852. Может, диализнуть против 100 mM бикарбоната аммония и всех делов то? |
|
Lola Пользователь Ранг: 5 |
24.06.2007 // 12:53:43
Редактировано 1 раз(а) Я уже по азоказеину проверила. Активность в 2 раза уменьшилась. Думаю, работать можно, просто время раза в 2 увеличу. А дальше форез покажет. Спасибо, что откликнулись А буфер этот для ренатурации белка, с которым работаю. |
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
25.06.2007 // 1:31:32
Если будете картировать digest, особенно масс-спеком, может сообщите увидите ли транспептидацию или какие либо странные пептиды, особенно с аргининами где их не должно быть. Буду очень признателен. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 3 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
