Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Фитонциды >>>

  Ответов в этой теме: 8

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Фитонциды
Komax
Пользователь
Ранг: 7

29.05.2004 // 11:16:03     
Глубоко уважаемые аналитики не подскажите какую нибудь методику по определению серусодержащих аминокислот в настойке чеснока(количественный анализ) в ГФ смотрел уже
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Artem
Пользователь
Ранг: 193


01.06.2004 // 10:32:20     

Komax пишет:
Глубоко уважаемые аналитики не подскажите какую нибудь методику по определению серусодержащих аминокислот в настойке чеснока(количественный анализ) в ГФ смотрел уже

Уважаемый Komax!

Вас иснтересует какая-то конкретная аминокислота или весь профиль, который есть в чесноке? Некоторые серосодержащие аминокислоты можно определять напрямую, а некоторые после соответствующей дериватизации.
Например, я определял аминоксилоты после дериватизации с динитрофторбензолом при рН 10 в системе:
колонка - Hypersil ODS или аналогичная
ПФ1: 0,01 М раствор ацетата амоония рН 6,0 уксусной кислотой - ацетонитрил (95-5)
ПФ2: 0,01 М раствор ацетата амоония рН 6,0 уксусной кислотой - ацетонитрил (50-50)
длина волны детектирования 360 нм
скорость ПФ 1 мл/мин.
Программа градиента в зависимости от определяемой аминокислоты. Попробуйте эту систему.
Артем
Garry
VIP Member
Ранг: 1076


01.06.2004 // 10:32:48     
Существует, по крайней мере о которых я знаю, два проверенных метода определения серусодержащих аминокислот. Первый с хлормеркурибензоатом натрия , а второй с реактивом Эллмана.

Выглядят они следующим образом :
1. метод с п-ХМБ натрия (Mr=379).
Приготовление 0,0005 М раствора п-ХМБ - навеску реактива переносят в мерную колбу 25-50 мл с 10-20 мл воды, подщелоченной 2 н КОН. Затем рН раствора доводят до 7,6 (точно)р-ром соляной кислоты (0,5 н) и доводят до метки водой. Солянку следует добавлять по каплям энергично при этом перемешивая, чтобы не происходило выпадения ХМБ в осадок при локальном закислении. Раствор пригоден до появления осадка.
Для определения концентрации полученного раствора ХМБ в две СФ-кюветы приливают по 2,8 мл 0,5 М р-ра хлорида калия (рН 7,6). В одну из кювет добавляют 0,05 мл р-ра ХМБ. Тщательно перемешивают содержимое пластмассовой палочкой и определяют оптическую плотность при 232 нм. Затем еще три раза добавляют по 0,05 мл р-ра ХМБ, каждый раз измеряя оптическую плотность при 232 нм.
По полученным данным рассчитывают концентрацию по ф-ле : С=(А232*(2,8+V))/ (16900*V), где V - объем добавленного р-ра ХМБ.
Собственно метода определения
В две СФ кюветы наливают: в одну 2,8 мл 0,5 М хлорида калия (рн=7,6), в другую 2,8 мл разведенного 0,5 М хлоридом калия (до 0,85 мг/мл аминокислот) исследуемого раствора. Измеряют оптическую плотность при 250 нм. Затем в обе кюветы приливают по 0,02 мл раствора ХМБ. Содержимое перемешивают и через две минуты определяют оптическую плотность при 250 нм. Затем последовательно еще 5-6 раз добавляют по 0,02 мл раствора ХМБ, пока не будет достигнуто плато в приросте оптической плотности.Точка перегиба на графике зависимости (по Х - объем ХМБ, по Y -прирост оптической плотности) и будет той точкой эквивалентности, когда количество сульфгидрильных групп будет равно превратившемуся в меркаптид ХМБ.

2. Метод с реактивом Эллмана
Реактивы:
а).Фосфатный (или трис-HCL) буфер 10 мМ, рн=8,0
б).Исследуемый раствор с концентрацией аминокислот (30-70 мкМ) в вышеописанном буфере с 1 мМ ЭДТА.
с).ДТНБ (дитиодинитробензойная к-та) реактив Эллмана. 10 мМ раствор в вышеописанном буфере.

В СФ кювету вносят испытуемый раствор и добавляют 5-10 кратный молярный избыток раствора ДТНБ. Полученную смесь перемешивают и через 10 минут измеряют оптическую плотность при 412 нм. Спустя 30 минут проводят повторное определение оптической плотности , используя в качестве контрольного раствор,содержащий раствор ДТНБ и буфер вместо испытуемого раствора в таких же соотношениях. Аналогично проводят реакцию с стандартом (метионин, цистеин) для построения калибровки.
Komax
Пользователь
Ранг: 7


02.06.2004 // 17:39:10     
Меня интересует весь профиль.
zep
Пользователь
Ранг: 9


07.11.2004 // 14:11:28     
уважаемый Artem!

может быть, Вам известно что-нибудь о хранении динитрофторбензола? у меня похожая методика (определяем метионин) и в последнее время интенсивность поглощения упала в 3 раза. реактиву (ДНФБ) уже года 2, хранится в темноте. Это может быть связано с превращениями ДНФБ или дело в чем-то другом?
Artem
Пользователь
Ранг: 193


08.11.2004 // 10:42:22     

zep пишет:
уважаемый Artem!

может быть, Вам известно что-нибудь о хранении динитрофторбензола? у меня похожая методика (определяем метионин) и в последнее время интенсивность поглощения упала в 3 раза. реактиву (ДНФБ) уже года 2, хранится в темноте. Это может быть связано с превращениями ДНФБ или дело в чем-то другом?

Вообще-то сам ДНФБ хранится в темноте и, желательно, при температуре не выше +10 грдС.
При других условиях он может как разлагаться, так и образовывать димер. В таких случаях его можно перекристаллизовать из спирта.
Что же касается получения производных - внимательно посмотрите методику. Может быть не соблюли рН или температуру реакционной смеси.
Если тут все правильно, то попробуйте перекристаллизовать ДНФБ и работать со свежеприготовленным реактивом. Хотя по своему опыту знаю, что изопропанольный раствор ДНФБ в холодильнике храниться до 1 года, и его реакционная способность не уменьшается.

Артем
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Рентгенофлуоресцентный анализатор МАГНИЙ-1 Рентгенофлуоресцентный анализатор МАГНИЙ-1
Рентгенофлуоресцентный анализатор с камерой вакуумирования для количественного анализа состава металлов и сплавов в диапазоне от Mg (магний) до Am (америций). Выпускается в носимом варианте.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
zep
Пользователь
Ранг: 9


08.11.2004 // 18:31:23     
Artem, спасибо огромное за ответ...
Проблему уже решили - нашли более новый реактив. А тот приехал из Америки внутри фломастера в баночке )) но до этого работал..
Artem
Пользователь
Ранг: 193


08.11.2004 // 18:38:35     

zep пишет:
Artem, спасибо огромное за ответ...
Проблему уже решили - нашли более новый реактив. А тот приехал из Америки внутри фломастера в баночке )) но до этого работал..


Перекристаллизуйте из спирта и пользуйтесь. Он не должен испортиться.
Nanazha
Пользователь
Ранг: 1


21.10.2005 // 15:22:10     
Добрий день!Скажите,пожалуста,какие есть методи идентификации и качественного определения аллиина в настойке чеснока?Большое Вам спасибо!

  Ответов в этой теме: 8

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты