Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

нингидриновый количественный метод для определения альфа-аминного азота >>>

  Ответов в этой теме: 4

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: нингидриновый количественный метод для определения альфа-аминного азота
aslovo
Пользователь
Ранг: 2

30.01.2007 // 0:30:29     
Уважаемые коллеги, не подскажете работающую методику для количественного определения альфа-аминного азота с помощью нингидрина?
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Garry
VIP Member
Ранг: 1076


30.01.2007 // 10:20:50     
Если у Вас имеется раствор пептидов, то поступают следующим образом : 0,3 мл исследуемого раствора + 1 мл 2,5 н NaOH. Инкубируют при 90°С в течение 2,5 ч. Затем добавляют 1 мл 30% уксусной кислоты и далее проводят нингидриновую реакцию следующим образом :
к пробе добавляют 0,25 мл 0,2 М цитратного буфера рН-5 содержащего 0,2 % SnCL2, смесь перемешивают, добавляют 0,25 мл 4 %-ного раствора нингидрина в пропаноле. Помещают в кипящую баню на 10 мин. Охлаждают и добавляют 3 мл 50% пропанола. Раствор перемешивают и колориметрируют при 570 нм.
Т.Дэвени, Я.Гергей "Аминокислоты, пептиды и белки" М."Мир" 1976, с.228
aslovo
Пользователь
Ранг: 2


30.01.2007 // 13:41:57     
спасибо за информацию.
именно этой методикой я пользовался, и у меня возникли проблемы
- окраска появляется и через 5 мин. ослабевает (по Moore & Stein нужно греть 20 мин; дык он становится желтым как и был. У Вас 10 мин. и раствор нингидрина в пропаноле, а не в метилцеллозольве. У меня не было последнего и я брал этилцеллозольв.
Попробую Вашу методику, но будут наверное сложности с растворением хлорида олова (2). У меня получается суспензия. Нигде не пишут, что так и должно быть. Может олово старое?
Поэтому я собираюсь использовать другой восстановитель, например, аскорб. к-ту.
Не слышали, случаем, про такое?
Garry
VIP Member
Ранг: 1076


30.01.2007 // 16:31:56     

aslovo пишет:
спасибо за информацию.
именно этой методикой я пользовался, и у меня возникли проблемы
- окраска появляется и через 5 мин. ослабевает (по Moore & Stein нужно греть 20 мин; дык он становится желтым как и был. У Вас 10 мин. и раствор нингидрина в пропаноле, а не в метилцеллозольве. У меня не было последнего и я брал этилцеллозольв.
Попробую Вашу методику, но будут наверное сложности с растворением хлорида олова (2). У меня получается суспензия. Нигде не пишут, что так и должно быть. Может олово старое?
Поэтому я собираюсь использовать другой восстановитель, например, аскорб. к-ту.
Не слышали, случаем, про такое?

Про аскорбинку как восстановитель для этих целей я не слышал. А вот раствор хлорида олова я готовил следующим образом. Навеску продажного хлорида олова (0,2 г) я растворял при нагревании в 10 мл конц. солянки + 10 мл воды, а затем доводил до метки после растворения последнего. Конечно может происходить потеря кристаллизационной воды при хранении и старение старых реактивов, то тогда раствор хлорида олова получают из непосредственно чистого олова (в палочках) и солянки. В принципе, Вы можете проверить качество Вашего хлорида олова по следующей методе :
0,5 г хлорида олова растворяют в 15 мл соляной кислоты (конц.), добавляют 10 мл воды и 5 мл хлороформа. Затем быстро титруют 0,05 М раствором йодата калия до обесцвечивания хлороформенного слоя.
1 мл 0,05 М йодата калия соответствует 22,56 мг SnCL2*2H2O
Garry
VIP Member
Ранг: 1076


30.01.2007 // 16:36:00     
Да, если у Вас пептиды состоят преимущественно из пролина и оксипролина, то фиолетовой окраски Вы не дождетесь.

  Ответов в этой теме: 4

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты