| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Идентификация церамида >>>
|
 |
| Автор | Тема: Идентификация церамида | ||
|
vesalii Пользователь Ранг: 3 |
 25.01.2007 // 21:53:16
Здравствуйте. Обращаюсь за помощью, может, кто сталкивался с моей проблемой. Получаем при ТСХ пятна. Знаем, где должен быть церамид. Но йодом он не определяется. (концентрация, наверное, мала) Есть методики с фосфорно-молибденовой кислотой и молибденовокислым аммонием. Но я как-то не догоняю - эти вещества для идентификации фосфолипидов. А в церамидах и изначально в церамиде фосфора нет и в помине. Зато там есть амидная связь - но биуретовая реакция на пластине - это очень незначительное изменение окраски - пик не ловится. Может, кто знает, при помощи чего поймать церамид? Или что сделать, чтобы найти его вышеописанными способами? спасибо заранее. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Chatkin Пользователь Ранг: 46 |
25.01.2007 // 22:59:19
Здравствуйте. Попробуйте спросить в соседнем форуме у биологов, они чаще имеют дело с нервной тканью. Удачи |
||
|
Chatkin Пользователь Ранг: 46 |
25.01.2007 // 23:01:59
РS А может Йод просто обесцвечивается из за реакции с двойной связью? |
||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
26.01.2007 // 0:22:48
Извините если не в тему, но церамиды замечательно определяются тандемной масс-спецтрометрией, даже без разделения от фосфолипидов и триглицеридов. Анализ будет более точным (вернее, улучшится динамический диапазон) если экстрагировать полосу с ТСХ. Если интересно, я могу дать ссылки на оригинальные методические статьи |
||
|
vesalii Пользователь Ранг: 3 |
26.01.2007 // 2:16:54
Хм, да.... по-идее может. Но он же все равно в избытке берется. Только он в камере в избытке получается. И, даже прореагировав, пятно выявить должен бы... Ну да ладно. Если ничего не получится, пойду у биологов спрашивать. (у самого работа по патофизиологии) |
||
|
vesalii Пользователь Ранг: 3 |
26.01.2007 // 2:19:11
Почему же не в тему? Нужно будет узнать, потянет ли наша лаборатория тандемную масс-спектрометрию (даже слабо представляю, что это). Если не трудно - дайте пожалуйста ссылки на статьи. Спасибо) |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
26.01.2007 // 12:50:50
ОК, здесь проверенно работающие методы (вообще литературы по анализу церамидов масса): Liebisch, G., Drobnik, W., Reil, M., Trumbach, B., Arnecke, R., Olgemoller, B., Roscher, A., and Schmitz, G. (1999). Quantitative measurement of different ceramide species from crude cellular extracts by electrospray ionization tandem mass spectrometry (ESI-MS/MS). J Lipid Res 40, 1539-1546. Han, X. (2002). Characterization and direct quantitation of ceramide molecular species from lipid extracts of biological samples by electrospray ionization tandem mass spectrometry. Anal Biochem 302, 199-212. Эта статья постарее, но уж больно душевно написано: Gu, M., Kerwin, J. L., Watts, J. D., and Aebersold, R. (1997). Ceramide profiling of complex lipid mixtures by electrospray ionization mass spectrometry. Anal Biochem 244, 347-356. Удачи! |
||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
26.01.2007 // 13:43:00
Редактировано 1 раз(а) Знаю и скажу, потому что сам долбался с подобной проблемой до одури. У меня была схожая проблема. Разрабатывал методологию количественного контроля лизолецитина в легочном сурфактанте. Уже как я не "приседал" возле него. Перепробовал и ацетат меди в 30 % фосфорной кислоте и 5 % раствор фосфорно-молибденовой кислоты и раствор флуоресцеина. В общем кефалины, лицетин, сфингомиелин, инозитфосфатидилхолины, фосфатидилсерин, ФГ и даже холестерин - все отлично получается при проявлении 5 % водной фосфорно-молибденовой кислотой. После хроматографирования окунаешь пластинку в раствор, промакиваешь фильтровалкой и греть при 100-120 С в шкафу до появления темно-синих пятен на лимонно-желтом фоне. Да, подвижную фазу лучше брать нейтральную, - классическую - на мой взгляд информативнее, чем щелочные (с триэтиламином) или кислые (с уксусной к-той). А вот лизолецитин - ну никак ...  . Я тут даже постил по этому поводу. Ну как будто тот же лицетин, малость укушенный, а ничем не проявляется.Скажу Вам, что есть два гарантированых метода :1. Реакция Ауэрбаха. 2. Реактив Драгендорфа. Що це такэ ? 1. Реакция на атомы азота в фосфолипидах. Готовите раствор бромфенолового синего (0,05 г в 10 мл ацетона). И раствор нитрата серебра (1 г в 100 мл воды), затем раствор бромфенолового доводите до 100 мл раствором нитрата серебра. Проявление : Пластинку окунаете в этот раствор чуть-чуть подержите в нем, промываете прточной водой и учитываете (денситометрируете). Я обалдел, когда обнаружил энтот самый лизолецитин на пластинке, причем четкие фиолетовые пятна на бледно-голубом фоне. Можно еще попробовать и некую модификацию - раствор бромфенолового синего в 0,1 м растворе гидроксида калия. Пластинку опрыскиваете или окунаете и греете при 100 С. 2. Ну стандартный проявитель , пропись найти не проблема. Тоже отлично проявляет азотсодержащие вещества. |
||
|
Fironju Пользователь Ранг: 3 |
11.12.2018 // 12:49:48
Добрый день, подскажите пожалуйста, а есть еще какие либо методики по церамидам, если возможно поделитесь ссылками. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 8 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
