Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ. Влияние реагентов на разделение. >>>

  Ответов в этой теме: 6

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: ВЭЖХ. Влияние реагентов на разделение.
DDT
Пользователь
Ранг: 73

10.03.2024 // 21:32:13     
Редактировано 1 раз(а)

Добрый вечер, уважаемые хроматографисты. Прошу совета. Мы определяем нуклеотиды с использованием в качестве подвижной фазы 0,1М фосфатный буферный раствор c pH=6,9 и используя хроматографическую колонку с фазой С18. Для однозначной идентификации нам предлагают прогнать через хроматографическую систему раствор АТФ, который также содержит: натрий карбонат безводный, натрий гидрокарбонат, этилендиаминтетрауксусную кислоту, пропиленгликоль.
Могут ли повлиять эти компоненты на хроматографическую колонку и дальнейшее разделение? Из литературы известно, что если добавлять какой-нибудь реагент, например ион-парный - триметиламин, то меняется механизм разделения и в дальнейшем хроматографическую колонку С18 уже сложно будет »реанимировать».
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
vmu
Пользователь
Ранг: 1248


11.03.2024 // 7:19:48     
Редактировано 2 раз(а)


DDT пишет:
Из литературы известно, что если добавлять какой-нибудь реагент, например ион-парный - триметиламин, то меняется механизм разделения и в дальнейшем хроматографическую колонку С18 уже сложно будет »реанимировать».

1. Триметиламин можно назвать ион-парным реагентом с натяжкой (слишком короткие у него углеводородные хвосты).
2. Его (вот тут не понял: триметиламин у вас в пробе или все-таки в ПФ?) и остальных (довольно безобидных) компонентов пробы вы вводите в колонку совсем мало. Это не то же самое, что подавать его в колонку в составе ПФ.
3. "Убивание" колонки ион-парным реагентом - в некоторой степени предрассудок, хотя все же желательно для конкретной ион-парной хроматографии использовать выделенную только для этого колонку.
4. Если вы делите нуклеотиды на колонке C18, в вашем "0,1М фосфатный буферный раствор c pH=6,9", сюрприз, должен быть ион-парный реагент, например триэтиламин или трибутиламин.
OldBrave
VIP Member
Ранг: 1315


11.03.2024 // 19:49:53     
Редактировано 2 раз(а)


DDT пишет:
...Для однозначной идентификации нам предлагают прогнать через хроматографическую систему раствор АТФ, который также содержит: натрий карбонат безводный, натрий гидрокарбонат, этилендиаминтетрауксусную кислоту, пропиленгликоль...

не совсем понятно, что Вы имеется ввиду...
"...натрий карбонат безводный...", а это вообще о чем в растворе-то?
Если речь идет о том, чтобы вколоть препарат "Натрия аденозинтрифосфат раствор для в/в введения", то можете смело разбавить и вколоть...
DDT
Пользователь
Ранг: 73


12.03.2024 // 0:37:49     
Редактировано 1 раз(а)

Благодарю за советы. Мы не используем ион-парный реагент и у нас он не содержится не в пробе не в ПФ. Все нуклеотиды хорошо разделяются при использование в качестве подвижной фазы фосфатный буфер и 1-5% ацетонитрила. Мы немного засомневались в стандарте АТФ, так как он просрочен и решили приобрести раствор АТФ в аптеке https://planetazdorovo.ru/perm/catalog/lekarstva-i-bad/serdtse-i-sosudy/pitanie-miokarda/natriya-adenozintrifosfat-vial-rastvor-20/ Методом добавок еще раз хотим убедится, что все делаем правильно.
voodensky
Пользователь
Ранг: 528


12.03.2024 // 12:01:45     
А какая у вас колонка, если не секрет? Просто C18? Нет приставки AQ или чего-то связанного с водой?
DDT
Пользователь
Ранг: 73


18.03.2024 // 0:34:48     
Редактировано 1 раз(а)


voodensky пишет:
А какая у вас колонка, если не секрет? Просто C18? Нет приставки AQ или чего-то связанного с водой?
У нас колонка Discovery® C18 HPLC Column 25 cm × 4.6 mm × 5 мкм
(https://www.sigmaaldrich.com/RU/en/product/supelco/504971)
С 100 % водный буфер пропускаем и пока все нормально.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Аквадистиллятор электрический ДЭ-4-02 Аквадистиллятор электрический ДЭ-4-02
Аквадистиллятор предназначен для производства дистиллированной воды, отвечающей требованиям действующей Госфармакопеи РФ, путем тепловой перегонки воды, отвечающей требованиям Сан.ПиН2.1.4.559-96.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
vmu
Пользователь
Ранг: 1248


18.03.2024 // 7:20:12     

DDT пишет:
С 100 % водный буфер пропускаем и пока все нормально.
Периодически (раз в неделю или после каждой серии проб) промывайте колонку более сильным элюентом, доводя долю ацетонитрила до 100 %, чтобы смыть накапливающиеся в колонке при работе со слабым элюентом гидрофобные загрязнения.

  Ответов в этой теме: 6

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты