Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Увеличилось время удерживания пиков ВЭЖХ >>>

  Ответов в этой теме: 21
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Увеличилось время удерживания пиков ВЭЖХ
hisamazu
Пользователь
Ранг: 699

02.11.2023 // 16:28:13     
Уважаемые коллеги! Ищу совета, что делать в связи с нижеописанной проблемой.
По существующей методике определяем токоферола ацетат и ретинола пальмитат в некоем лекарственном препарате. В определенный момент увеличилось время удерживания пиков (процентов на 10 - 15). Значение воспроизводится. Подвижная фаза ацетонитрил:метиленхлорид 85:15. Режим изократический, 1 мл/мин, но реализован довольно странно -как градиент. По линии А идет метиленхлорид в количестве 0,15 мл/мин, по В-ацетонитрил в количестве 0,85 мл/мин и так весь анализ. Другую колонку попробовали, там время удерживания еще больше, данных по предыдущему значению на ней нет. У меня нет такого опыта -что происходит, когда умирает колонка ВЭЖХ? Какие симптомы?
Если исключить проблемы колонки, то чисто теоретически такое может быть, если нарушается соотношение между метиленхлоридом и ацетонитрилом : чем меньше метиленхлорида, тем больше время удерживания. Попробовали замесить готовую фазу и запустить в обычном изократическом режиме по одной из линий. Выяснили, что одна и та же фаза по разным линиям дает разные времена удерживания. Предполагая, что, возможно, расход по одной из линий неточный, попробовали померить расход по каждой из линий А и В, пропуская через колонку ацетонитрил. Линия В, по которой обычно подается ацетонитрил, дала нормальный расход (ну, почти -намерили 15.4 мл ацетонитрила за 15 мин) .Попробовали проверить линию А, по которой обычно идет метиленхлорид. Но запустить чистый хлористый метилен в колонку не можно, поэтому меряли по этой линии, но ацетонитрилом. Первый из трех замеров -13,5 мл за 15 мин, второй и третий -15 мл/мин. Вот я и думаю -есть ли еще вещи, которые можно проверить самостоятельно (квалификация по разборке хроматографа у меня не очень), или уже пора звать специально обученного человека? Мне предстоит работать с методикой, где будет уже нормальный градиент, а вот в точности расходов (или еще чем-то) я сейчас не уверена.
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
КурОлька
Пользователь
Ранг: 26


02.11.2023 // 17:32:20     
смешение идет на стороне низкого или высокого давления?
voodensky
Пользователь
Ранг: 524


02.11.2023 // 17:53:20     
Возьмите мерный цилиндр и смешайте 15 объемом метиленхлорида и 85 объемом ацетонитрила и посмотрите, какой объем в итоге получится.
Изократический и градиентный режим - это режим изменения состава подвижной фазы. Изократический - состав подвижной фазы не изменяется во времени. Его можно реализовать двумя способами. Смешать два раствора (в вашем случае метиленхлорид и ацетонитрил) в одной банке и подать в хроматограф через 1 канал. Либо в один канал поставить хлористый метилен, а во второй - ацетонитрил и смешивать за счет сместителя (на стороне высокого или низкого давления). Но в обоих случаях это изократический режим, так как состав подвижной фазы не меняется со времени.
Но эти два способа приводят к разным скоростям подвижной фазы и, соответственно, к разным временам удерживания. См. вопрос про смешение в мерном цилиндре.
OldBrave
VIP Member
Ранг: 1304


02.11.2023 // 19:35:59     

hisamazu пишет:
Уважаемые коллеги! Ищу совета, что делать в связи с нижеописанной проблемой.
...В определенный момент увеличилось время удерживания пиков (процентов на 10 - 15). Значение воспроизводится. Подвижная фаза ацетонитрил:метиленхлорид 85:15. Режим изократический, 1 мл/мин, но реализован довольно странно -как градиент. По линии А идет метиленхлорид в количестве 0,15 мл/мин, ....

Используемая Вами схема часто применяется при разработке метода при подборе элюента для изократического разделения. Она не обеспечивает надежного получения нужного состава подвижной фазы, - появление загрязнений в клапанах насосов, не четкое срабатывание крана-селектора линий с растворителями и др. Лучше и надежней сделать нужный состав элюента и качать одним насосом.
kump
Пользователь
Ранг: 3107


02.11.2023 // 22:02:28     
Присоединяюсь к советам. Использовать на изократике два насоса, это то, что называется модным термином "технический фетишизм".
hisamazu
Пользователь
Ранг: 699


03.11.2023 // 7:33:34     

voodensky пишет:
Возьмите мерный цилиндр и смешайте 15 объемом метиленхлорида и 85 объемом ацетонитрила и посмотрите, какой объем в итоге получится.
Изократический и градиентный режим - это режим изменения состава подвижной фазы. Изократический - состав подвижной фазы не изменяется во времени. Его можно реализовать двумя способами. Смешать два раствора (в вашем случае метиленхлорид и ацетонитрил) в одной банке и подать в хроматограф через 1 канал. Либо в один канал поставить хлористый метилен, а во второй - ацетонитрил и смешивать за счет сместителя (на стороне высокого или низкого давления). Но в обоих случаях это изократический режим, так как состав подвижной фазы не меняется со времени.
Но эти два способа приводят к разным скоростям подвижной фазы и, соответственно, к разным временам удерживания. См. вопрос про смешение в мерном цилиндре.

Спасибо, интересные сведения. Но вопрос-то был не об этом. А о том, что в варианте, когда растворители подавались по разным линиям, грубо говоря, на прошлой неделе, позавчера, вчера - одно время удерживания, а сегодня,завтра и неделю спустя- уже другое. Метиленхлорид и ацетонитрил при смешении изменяют объем (кстати, все-таки любопытно, насколько) одинаково и вчера, и сегодня, и год назад.. Проблема в этом, а не в разнице объемов между смешанным заранее и уже в хроматографе.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Ассоциация аналитических центров «Аналитика» Ассоциация аналитических центров «Аналитика»
Ассоциация объединяет специалистов в области прикладной аналитической химии и работает под эгидой Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации (Ростехрегулирование) и Научного Совета по аналитической химии РАН (НСАХ РАН). В Ассоциацию входит более 130 членов - лабораторий отраслевых и академических институтов, ВУЗов, организаций Ростехрегулирования, предприятий различных форм собственности.
hisamazu
Пользователь
Ранг: 699


03.11.2023 // 7:39:53     

OldBrave пишет:
Используемая Вами схема часто применяется при разработке метода при подборе элюента для изократического разделения. Она не обеспечивает надежного получения нужного состава подвижной фазы, - появление загрязнений в клапанах насосов, не четкое срабатывание крана-селектора линий с растворителями и др. Лучше и надежней сделать нужный состав элюента и качать одним насосом.
Большое спасибо, осознала. Получается, лучше нам позвать специально обученного человека, ибо покопаться в клапанах насосов и поковырять кран-селектор мне слабо, по крайней мере пока. А в вышеназванных агрегатах пластиковые детали есть? В мануале от прибора пишут, что по пути следования фаза может соприкасаться с фторопластом и РЕЕК, но на каких этапах продвижения -данных нет. А вот РЕЕК -то чистый метиленхлорид не очень и любит.
vmu
Пользователь
Ранг: 1206


03.11.2023 // 7:42:14     
Редактировано 3 раз(а)


hisamazu пишет:
что делать в связи с нижеописанной проблемой... В определенный момент увеличилось время удерживания пиков (процентов на 10 - 15). Значение воспроизводится.
Это вообще не проблема, если ППХС выполняется. При желании время удерживания можно подкорректировать регулировкой состава ПФ, температуры колонки. См. ОФС "Хроматография" в ГФ. Там много чего допускается менять в условиях при необходимости.

hisamazu пишет:
По линии А идет метиленхлорид в количестве 0,15 мл/мин, по В-ацетонитрил в количестве 0,85 мл/мин

kump пишет:
Использовать на изократике два насоса, это то, что называется модным термином "технический фетишизм".
Никакого фетишиза. Нормальная тема, дающая определенные удобства и гибкость в работе. Хотя проблемы могут быть. Тут чистый дихлорметан нехорошая вещь: токсичный, летучий (41 град кип.), растворяющий полимеры (PEEK его не любит). Посмотрите в мануале от хроматографа. ДХМ может привести к проблемам с уплотнениями (сальниками) плунжеров насоса, если уплотнения не под нормально-фазовые элюенты. В принципе я бы тоже тут мешал элюент вручную. Правда, в этом случае может возникнуть проблема с нестабильностью состава ПФ и времен удерживания из-за постепенного улета ДХМ из заранее смешанной ПФ. Лучше бы без ДХМ обходиться, но тут от методики не отступишь.

hisamazu пишет:
что происходит, когда умирает колонка ВЭЖХ? Какие симптомы?
Снижается эффективность (число тарелок) и разрешение пиков, ухудшается форма пиков (асимметрия, плечи, двоение), растет давление, времена удерживания обычно снижаются, хотя при загрязнении колонки могут и расти.

hisamazu пишет:
Вот я и думаю -есть ли еще вещи, которые можно проверить самостоятельно
При работе обращайте внимание на амплитуду колебаний давления. Больше 1 % от давления плохо. Правильность скорости подачи элюента можно проверить и с водой как ПФ и без колонки, только длинный (метры) тонкий (0.13 мм) капилляр желательно поставить вместо колонки, чтобы давление было сопоставимым с рабочим давлением с колонкой. Есть еще тесты системы градиента, когда в один канал заливают воду, а в другой канал заливают воду с добавкой около 0.1-0.5 % ацетона, задают разные соотношения двух каналов, смотрят, как меняется сигнал УФ детектора (ацетон поглощает УФ). Типа при ступенчатой смене состава ПФ с 80/20 на 30/70 сигнал детектора тоже должен расти типа с 20 у.е. до 70 у.е. Гуглите.
voodensky
Пользователь
Ранг: 524


03.11.2023 // 13:53:58     

hisamazu пишет:

OldBrave пишет:
Используемая Вами схема часто применяется при разработке метода при подборе элюента для изократического разделения. Она не обеспечивает надежного получения нужного состава подвижной фазы, - появление загрязнений в клапанах насосов, не четкое срабатывание крана-селектора линий с растворителями и др. Лучше и надежней сделать нужный состав элюента и качать одним насосом.

Большое спасибо, осознала. Получается, лучше нам позвать специально обученного человека, ибо покопаться в клапанах насосов и поковырять кран-селектор мне слабо, по крайней мере пока. А в вышеназванных агрегатах пластиковые детали есть? В мануале от прибора пишут, что по пути следования фаза может соприкасаться с фторопластом и РЕЕК, но на каких этапах продвижения -данных нет. А вот РЕЕК -то чистый метиленхлорид не очень и любит.
Пока вы не раскроете секрет на каком приборе работаете, никто детально не подскажет, стоит копаться или нет.
vmu
Пользователь
Ранг: 1206


03.11.2023 // 17:21:32     

hisamazu пишет:
есть ли еще вещи, которые можно проверить самостоятельно (квалификация по разборке хроматографа у меня не очень)?
PA/PH/OMCL (11) 04 R6
QUALIFICATION OF EQUIPMENT
ANNEX 1: QUALIFICATION OF LIQUID CHROMATOGRAPHY EQUIPMENT
https://www.edqm.eu/documents/52006/128968/omcl-quality-management-document-annex-1-qualification-of-hplc-equipment.pdf/026e275c-2867-c216-9576-1b62ac13ef4e?t=1628491788491
hisamazu
Пользователь
Ранг: 699


04.11.2023 // 9:45:01     

voodensky пишет:

hisamazu пишет:

OldBrave пишет:
Используемая Вами схема часто применяется при разработке метода при подборе элюента для изократического разделения. Она не обеспечивает надежного получения нужного состава подвижной фазы, - появление загрязнений в клапанах насосов, не четкое срабатывание крана-селектора линий с растворителями и др. Лучше и надежней сделать нужный состав элюента и качать одним насосом.

Большое спасибо, осознала. Получается, лучше нам позвать специально обученного человека, ибо покопаться в клапанах насосов и поковырять кран-селектор мне слабо, по крайней мере пока. А в вышеназванных агрегатах пластиковые детали есть? В мануале от прибора пишут, что по пути следования фаза может соприкасаться с фторопластом и РЕЕК, но на каких этапах продвижения -данных нет. А вот РЕЕК -то чистый метиленхлорид не очень и любит.

Пока вы не раскроете секрет на каком приборе работаете, никто детально не подскажет, стоит копаться или нет.
Пардон, как-то подзабылось, что штатный телепат может уйти в отпуск. Не секрет, Shimadzu Prominence LC-20 с ручным вводом, года так 2014. В Питере благодаря деятельности Аналита они были весьма популярны и встречаются очень часто.

  Ответов в этой теме: 21
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты