| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Разделение аминокислот без дериватизации ВЭЖХ >>>
|
 |
| Автор | Тема: Разделение аминокислот без дериватизации ВЭЖХ | |||||
|
SauerTroger Пользователь Ранг: 3 |
 21.04.2023 // 5:28:06
Редактировано 1 раз(а) Всем здравствуйте! Только начал заниматься хроматографией, поручили разделить 20 аминокислот с помощью Waters UPLC H-class. Колонка ОФ Acquity UPLC BEH C18 column (2.1 × 50 mm, 1,7 μm). Не понимаю пока как уравновесить колонку. Узнал, что они поставляются в 100% ацетонитриле. Попробовал посчитать объем колонки и прогнать 10 объемов р-ра ацетонитрил : вода 80:20 (скорость потока 0.2 мл/мин, 9 мин). Далее градиентное элюирование А - вода, B - ацетонитрил: Начало - 2% В 1,5 минуты - до 50% В 5 минут - 2% В. Ничего не разделяется кроме ароматических аминокислот. Остальные выходят на 1 минуте (значит ничего не задерживается?) Предполагаю, что из-за наличия разной pI для аминокислот, то нужен буфер, чтобы перевести их из ионизированного в нейтральное состояние, чтобы они задерживались на колонке.. Подскажите пожалуйста, может я что-то неправильно сделал… |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
vmu Пользователь Ранг: 1237 |
21.04.2023 // 7:05:38
Не занимайтесь ерундой. У Waters есть готовое решение с дериватизацией: см. AccQ-Tag и AccQ-Tag Ultra. |
|||||
|
SauerTroger Пользователь Ранг: 3 |
21.04.2023 // 7:08:14
К сожалению нет возможности эти kit’ы приобрести. Получается без них никак не получится? |
|||||
|
Dexter Пользователь Ранг: 29 |
21.04.2023 // 8:26:02
Если это дипломная работа то проще купить киты). По сути если удасться подобрать условия (буфер) и правильный градиент, то продадите разработку в waters |
|||||
|
SauerTroger Пользователь Ранг: 3 |
21.04.2023 // 8:41:56
XD |
|||||
|
vmu Пользователь Ранг: 1237 |
21.04.2023 // 8:49:11
Редактировано 1 раз(а) Если вам надо 5-10-20 аминокислот, а не 2-3 ароматических, то без дериватизации никак. Есть несколько вариантов предколоночной дериватизации. Реагенты можно купить и не в виде готовых наборов. Тот же реагент из AccQ-Таg можно купить не у Waters. Но там еще и элюент Waters продают в виде концентрата неизвестного точно состава, поэтому, не покупая его, придется и с условиями разделения попрыгать. Еще ходовой вариант дериватизации перед ОФ ВЭЖХ - дерив. с ОФА. Есть вариант катионообменного разделения с постколоночной дериватизацией (с нингидрином или ОФА), необходимой в данном случае чисто для нормального детектирования. Но тут нужен (нагреваемый для нингидрина) послеколоночный реактор. Вообще, даже с готовыми методиками, приборами и реагентами это не самая простая задачка для новичка в хроматографии. Там везде есть свои сложности как с дериватизацией, так и с разделением. Это не говоря о пробоподготовке неназванных объектов, которые вы хотите анализировать. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
ATem Пользователь Ранг: 655 |
21.04.2023 // 9:48:58
В обращенной фазе без танцев с бубном (да и с ними тоже не всегда) с АК будет проблема. Варианты - катионный обмен, гидрофилка. Либо дериватизация. Можно попробовать FMOC-Cl, DNS-Cl для начала. Но все разделить вряд ли получится, удерживание будет обуславливаться в основном гидрофобным радикалом дериватизирующего агента. |
|||||
|
Andrew VIP Member Ранг: 1370 |
24.04.2023 // 1:27:35
без дериватизации можно делить аминокислоты на мультимодальных колонках. Можно купить через Миллаб колонки Влада Орловского. Погуглиnе HELIX Chromatography |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 7 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
