Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ: непрерывный рост поглощения после смены растворителей >>>

  Ответов в этой теме: 7

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: ВЭЖХ: непрерывный рост поглощения после смены растворителей
Septiss
Пользователь
Ранг: 4

27.02.2021 // 20:44:06     
Здравствуйте, уважаемые, химики-хроматографисты!
Очень нуждаюсь в квалифицированной помощи...
Проблема состоит в том, что произошли какие-то странности с поглощением после смены растворителей
В качестве растворителей использую А: вода+0,1%ТФУК и Б:MeCN+0,1%ТФУК
До замены растворителя хроматограмма имела следующий профиль:

После смены растворителей стал таким:

Речь идет про длину волны 214 нм.
градиент от 0 Б до 100 Б за 46 минут
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
voodensky
Пользователь
Ранг: 454


28.02.2021 // 1:17:04     
Смена растворителя - это замена на более свежий?
Та хроматограмма, которая представлена - это первая хроматограмма после смены растворителя?
Septiss
Пользователь
Ранг: 4


28.02.2021 // 8:38:50     

voodensky пишет:
Смена растворителя - это замена на более свежий?
Та хроматограмма, которая представлена - это первая хроматограмма после смены растворителя?

Да, замена на более свежий
Та хроматограмма (она вторая по порядку), точнее сказать кусок хроматограммы - не первая, честно признаться уже несколько раз заменяли растворители потому, что стали происходить такие вещи как: тангенциальный рост поглощения с ростом растворителя Б, или до этого тоже самое, но в отрицательную область поглощения.
Хотя система вода+0,1%ТФУК и ацетонитрил +0,1%ТФУК уже опробированная ранее неоднократно для анализа пептидов, но теперь начались какие-то фокусы
voodensky
Пользователь
Ранг: 454


28.02.2021 // 9:17:40     
То, что у Вас изменяется поглощение - это нормально. При смешивании ацетонитрила с водой изменяется объем, соответственно изменяется концентрация ТФУК.
Раствор ТФУК одинаковой концентрации у меня ни разу в жизни приготовить не получилось. Она парит, испаряется из ПФ и т. д. Поэтому при смене раствора всегда происходит рост или снижение поглощения. Вы ответили давольно размывчато. Вы сменили ПФ, провели 3-4 хроматограмму и предоставили фрагмент 4? Или сменили растворитель, запустили хроматограмму, посмотрели что поглощение растёт. Остановили не дожидаясь конца хроматограммы, сменили растворитель, запустили хроматограмму, поглощение теперь падает, остановили и т.д...?
Septiss
Пользователь
Ранг: 4


28.02.2021 // 10:24:35     

voodensky пишет:
То, что у Вас изменяется поглощение - это нормально. При смешивании ацетонитрила с водой изменяется объем, соответственно изменяется концентрация ТФУК.
Раствор ТФУК одинаковой концентрации у меня ни разу в жизни приготовить не получилось. Она парит, испаряется из ПФ и т. д. Поэтому при смене раствора всегда происходит рост или снижение поглощения. Вы ответили давольно размывчато. Вы сменили ПФ, провели 3-4 хроматограмму и предоставили фрагмент 4? Или сменили растворитель, запустили хроматограмму, посмотрели что поглощение растёт. Остановили не дожидаясь конца хроматограммы, сменили растворитель, запустили хроматограмму, поглощение теперь падает, остановили и т.д...?


Попытаюсь как можно подробнее изложить суть проблемы.
Долгое время мы использовали ацетонитрил довольно старый (из бутылки, которая уже достаточно давно стоит в нашей лаборатории). Таже к обоим растворителям (вода и ацетонитрил) добавляли ТФУК до концентрации 0,1%
Уровень бэйслайн был частенько выше 0 (хоть и не значительно) но шел прямо (собственно первая картинка с профилем хоть и не идеальна, но более менее идет параллельно оси времени.
Проблемы начались, когда мы купили новый ацетонитрил (HPLC grade). Сначала мы начали снимать хроматограммы: бэйслайн стал уходить углом в отрицательное поглощение (где в области градиента - 50% ацетонитрила)
Подкислили воду - вроде выровняли бэйслайн
Затем в банке закончилась вода, поменяли, довели в ней концентрацию ТФУК как обычно до 0,1% - на начале бэйслайн стала уходить вверх, после 50% ацетонитрилла (на градиенте) снова начинает ползти в низ.
Решили, что конц. ТФУК в аценотрилле упала, поэтому заменили оба растворителя, результат представлен на рис. 2 (незаконченная хроматограмма)
Если концентрация в обоих растворителях +/- одинаковая, то и в любой смеси двух растворителей она должна быть одной и той же:
(xV1+xV2)/(V1+V2)=x(V1+V2)/(V1+v2)=x
voodensky
Пользователь
Ранг: 454


28.02.2021 // 10:45:01     
Вы судите о форме на какой хроматограмме после смены растворителя? По первой или 3-4?
По поводу концентрации. Пусть смешиваем ацетонитрил и воду. При смешения их объем уменьшается. Соответственно, концентрация ТФУК увеличивается.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Амперсенд, ЗАО Амперсенд, ЗАО
Разработка и поставка компьютерных систем сбора и обработки хроматографических данных. Торговая марка «Мультихром»
Septiss
Пользователь
Ранг: 4


28.02.2021 // 11:59:18     
Редактировано 1 раз(а)


voodensky пишет:
Вы судите о форме на какой хроматограмме после смены растворителя? По первой или 3-4?
По поводу концентрации. Пусть смешиваем ацетонитрил и воду. При смешения их объем уменьшается. Соответственно, концентрация ТФУК увеличивается.

На второй картинке одна хроматограмма, которую одновременно снимали при 4 разных длинах волн
По поводу концентрации, вы правы - прошу прощения
OldBrave
VIP Member
Ранг: 1181


01.03.2021 // 20:48:23     
Редактировано 1 раз(а)


Septiss пишет:
На второй картинке одна хроматограмма, которую одновременно снимали при 4 разных длинах волн
По поводу концентрации, вы правы - прошу прощения

Прогоните для начала градиент: 100% вода --> 100% ACN без добавления ТФУК и поймете в чем у вас проблема.

  Ответов в этой теме: 7

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты