Форумы ANCHEM.RU: Как правильно отмывать колонки для ВЭЖХ?

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Как правильно отмывать колонки для ВЭЖХ? >>>

Ответов в этой теме: 10

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Как правильно отмывать колонки для ВЭЖХ?

Nitrogen
Пользователь
Ранг: 11

27.01.2021 // 11:34:14

Редактировано 2 раз(а)

Доброго времени суток!

Коллеги, посоветуйте пожалуйста, как правильно отмывать С18 колонки для ВЭЖХ Zorbax 300SB C18, 9.4mm, 250 mm, Agilent 1100?
Проблема: после разделения грибного экстракта на градиенте вода/ацетонитрил все время сходит пик.
Работаем в градиенте - сульфат аммония/бидистилят, или трисовый буфер/ацетонитрил.
Разделяем растительные и грибные экстракты, вещества из плазмы крови крыс (после удаления клеток и белковых фракций).
Пробоподготовка: растворение в воде бидистилляте, фильтрация через 0.22 мкм фильтр шприцевой.
Пробывали отмывать градиентами изопропанола, ацетонитрила, пробовал отмывать изократикой, все равно сходит пик на 210 нм, 250 нм, и немного на 280 нм.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

voodensky
Пользователь
Ранг: 526

27.01.2021 // 11:38:11

А что значит "сходит пик"?

Nitrogen
Пользователь
Ранг: 11

27.01.2021 // 12:24:58

voodensky пишет:
А что значит "сходит пик"?

Детектор G1365B MWD регистрирует пик, который отображается в программе Chemstation на ПК как онлайн во время работы так и в соответствующем файле по завершению.

Детекция: 210, 250, 254, 230, 280 нм

voodensky
Пользователь
Ранг: 526

27.01.2021 // 12:59:48

И еще вопрос. Почему Вы думаете, что грязная колонка, а не порт ввода элементы ввода? Или грязный растворитель пробы или подвижная фаза?

Nitrogen
Пользователь
Ранг: 11

27.01.2021 // 13:19:29

voodensky пишет:
И еще вопрос. Почему Вы думаете, что грязная колонка, а не порт ввода элементы ввода? Или грязный растворитель пробы или подвижная фаза?

Я на этом форуме читал ситуацию, что советовали промыть петлю и инжектор. Пробу когда мою не колю, колю бидистилят. Он , судя по проводимости, чистый.
Чтобы проверить подвижную фазу мне нужен рефрактометр, он сломался на данный момент. В качестве подвижной фазы использую ацетонитрилл HPLC grade Sigma, и бидистиллят собственного производства.

Может. попробовать подсоединить насос в обход инжектора и петли?

Nitrogen
Пользователь
Ранг: 11

27.01.2021 // 13:21:37

Nitrogen пишет:
Может. попробовать подсоединить насос в обход инжектора и петли?

Причем время выхода пиков и форма пиков каждый раз одинакова и похожа на те белки, что были обнаружена на 280 нм в экстракте гриба. С каждой промывкой высота пиков немного уменьшается.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Химико-фармацевтический журнал
Ежемесячный научно-технический и производственный журнал. Освещает молекулярно-биологические проблемы создания лекарственных средств, методы синтеза и технологии производства новых лекарственных препаратов, иccледования cтpоения xимичеcкиx cоединений, методы анализа и контpоль пpоизводcтва.

voodensky
Пользователь
Ранг: 526

27.01.2021 // 13:35:40

Редактировано 1 раз(а)

Nitrogen пишет:
Пробу когда мою не колю, колю бидистилят. Он , судя по проводимости, чистый.

Бидистилят может и чистый, но когда Вы закалываете, то смываете с поверхности инжектора грязь. Она и попадает. Может и шприц грязный внутри и еще что-то. Вы анализируете белки, не думаю, что они вносят большой вклад в проводимость воды, поэтому проводимость - не показатель чистоты.

Nitrogen пишет:
Может. попробовать подсоединить насос в обход инжектора и петли?

Это был бы лучший вариант. Если лень пересоединять, то просто проведите программу вообще без закола. Как это сделать зависит от прибора. На Agilent 1100 не работал, не подскажу.

voodensky
Пользователь
Ранг: 526

27.01.2021 // 13:38:12

Nitrogen пишет:
В качестве подвижной фазы использую ацетонитрилл HPLC grade Sigma, и бидистиллят собственного производства.

А как же сульфат аммония и трис из первого сообщения?

Nitrogen
Пользователь
Ранг: 11

27.01.2021 // 14:03:29

voodensky пишет:

Nitrogen пишет:
В качестве подвижной фазы использую ацетонитрилл HPLC grade Sigma, и бидистиллят собственного производства.
А как же сульфат аммония и трис из первого сообщения?

Это на другой колонке, на фенилке. Тоже Zorbax.

P.S.:
Провожу программу без закола.
Взял у коллег воду miliQ из системы обратного осмоса. По проводимости тоже годная.

SergeyK
Пользователь
Ранг: 2168

27.01.2021 // 14:22:57

www.chemass.si/ca_content/Cleaning_and_maintaining_C-18_columns.pdf

Nitrogen
Пользователь
Ранг: 11

27.01.2021 // 14:42:13

SergeyK пишет:
www.chemass.si/ca_content/Cleaning_and_maintaining_C-18_columns.pdf

СПАСИБО!


Ответов в этой теме: 10	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты