Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ нуктеотидов >>>

  Ответов в этой теме: 2

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: ВЭЖХ нуктеотидов
Quasi
Пользователь
Ранг: 16

25.05.2006 // 9:24:26     
Уважаемые аналитики!
Подскажите, пожалуйста, систему для разделения стандартов нуклеотидов (аденозинмонофосфат, гуанозинмонофосфат, цитидинмонофосфат, уридинмонофосфат, тимидинмонофосфат)режиме обращенно-фазовой хроматографии на С18 со спектрофотометрическим детектированием.
Спасибо.
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Garry
VIP Member
Ранг: 1076


25.05.2006 // 9:55:36     
Редактировано 1 раз(а)

Попробуйте два варианта :
1. Изократика.
а).
Колонка : ODS C18
Подвижная фаза : A-метанол = 1 : 1 ; A : 0.005M диоктилсульфокуссинат натрия pH 2.5 10% муравьиной кислотой
б).
Колонка : Nucleosil 100 C18
Подвижная фаза : (1.61г тетрабутиламмония гидросульфат в 25мл)-1M NaH2PO4- Метанол-Вода=10-20-10-60

2. Градиенты.
а).
Колонка : Nucleosil 5 C18
Подвижная фаза : 0.2 M аммоний формиат pH 3.5; 0-5мин буфер, 5-11мин буфер/Метанол (96 - 4), 11-18 мин до буфер/метанол (70 - 30)
Комментарии :
Литература : J.Clin.Chem. Clin. Biochem. 22(1984) 175-184

б).
Колонка : Ultrasphere ODS
Подвижная фаза : A: 0,025 M KH2PO4 с 2 г/л тетрабутиламмония гидрофосфат; В: 0,125 M KH2PO4 с 2 г/л тетрабутиламмония гидрофосфат -Ацетонитрил = 1-3 %. Градиент линейный.

А детекция при 249- 260 нм

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


25.05.2006 // 12:06:41     

Одним словом, два варианта: с ион-парным и без ион-парного.

С ион-парным, думаю, пройдет на любой мало-мальско дышащей обращенке. 5мМ тетрабутиламмония (ТБА) сульфата или еще чего (только не бромида), и 30-50% ацетонитрила. Да, и буфер обычно закисляют (фосфоркой к примеру) до рН 3, но это спорно (можно попробовать и не кислить, но при этом удерживание будет прилично возрастать). Если решили поиграть рН буфера, то надо немножко 25мМ кислого фосфата добавить, чтоб была буферная сила.

Можно и без ион-парного, просто на 4% метанола или ацетонитрила и фосфатном буфере, закисленнным побольше (до рН 2.5, к примеру). Но тут далеко не любая колонка подойдет, может быть и фазовый коллапс, и плохое удерживание-разделение. Так, для Wakosil-а у меня есть такие хроматограммы для фосфатов тиамина, 16-и изменных нуклеиновых оснований (правда, они без фосф. остатков). Все делится хорошо и устойчиво.

Есть и модификация последней системы. Можно в буфер сразу добавить 1% триэтиламина, а потом уже кислить фосфоркой до 2.5. Подавать к столу с 2-10% ацетонитрила.

  Ответов в этой теме: 2

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты