Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Всем доброго времени суток! >>>

  Ответов в этой теме: 9

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Всем доброго времени суток!
Керинг
Пользователь
Ранг: 5

11.05.2006 // 23:18:26     
Всем доброго времени суток!
Помогите, кто, чем сможет. Необходима методика хроматографирования сахаров с помощь ГЖХ. Методика получения силильных производных сахаров, что лучше использовать в качестве внутреннего стандарта.
Заранее спасибо…( прибор Кристалл 5000.1 колонка DB-1).
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Max777
Пользователь
Ранг: 1


12.05.2006 // 0:02:26     
Так уж получилось, что сейчас пытаюсь по данной тематике что-нибудь найти. То что нашел достаточно старо в книге за 1975г.
Получение ТМС –производных сахаров
Навеска образца должна содержать не более 100мг сухого остатка и 40 мг воды. В навеску 6-7 мг фенил-β-глюкопиранозида (внутренний стандарт) и 1,0 мл пиридина. Чтобы образец растворился, смесь нагревают на водяной бане при 60С, плотно закрыв пробирку крышкой. После этого добавляют 0,9мл гексаметилдисиласазана и 0,1мл 99% трифторуксуной кислоты. Побирку закрывают, интенсивно встряхивают в течении 30 мин. Приготовленный раствор таким образом должен быть прозрачен, в противном случае его нагревают 5-10 мин при 60С и анализируют.
На счет условий хроматогарафирования не знаю как колонка DB- 1 выдержит ли температуру 350С.
Для ТМС производных сахаров на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным детектором:
-колонка из нержавеющей стали длиною 1,8 м диаметром 3,2 мм заполненной силанизированным хромосорбом W(60-80меш), содержащим 3% жидкой фазы OV-17;
-температурный интервал 150-350С с температурным градиентом 10 град/мин;
-температура инжектора и детектора 300С;
-объем вводимой пробы силилированного образца 5мкл;
-газ носитель гелий (либо азот) 2,7 атм. , 30мл/мин
-в случае пламенно-ионизационного детектора водород 0,8 атм., 30мл/мин, воздух 500мл/мин
-проба вводится в колонку беззадержки
-колонка выдерживается в изотермическом режиме 350С как правило около 10 минут (до полного элюирования тетрасахаридной фракции)
Есть методики ацетилирования и метилирования но применяются достаточно узко как я уяснил и там много проблем так что о количественном определение речь вести не приходится.
Perepelkin_K
Пользователь
Ранг: 3


12.05.2006 // 9:00:18     
Редактировано 1 раз(а)

Сам я серьёзно не сталкивался с подобными анализами. Но вот есть каталог Fluka по силилирующим агентам, там есть методики применения по конкретным агентам. Если интересно, то могу отсканировать по отдельным компонентам и выслать, скажите только по каким и куда.
По силилированию сахаров для ГХ с помощью ГМДС написано следующее (боюсь внести ошибку при переводе, напишу как есть):
1. Place 60-70 mg of 80% solids syrup in miniature reaction vial.
2. Dissolve in 1 ml pyridine.
3. Add 0.9 ml HMDS and mix.
4. Add 0.1 ml trifluoroacetic acid.
5. Shake vigorously for 30 sec.
6. Allow to stand for 15 min.
7. Analyse by GC.

По хроматографии: тут вам наверное и самому всё понятно - программирование до максимальных температур, начальная - достаточно низкая, чтобы разделялись легкие компоненты. Лайнер в испарителе наверное должен быть предварительно силанизирован, хотя надо думать после нескольких заколов он просиланизируется все равно. Заполнение лайнера - или пустой, или силанизированная вата - надо сравнивать. По воспроизводимости абсолютных величин заполненный лайнер конечно получше.
Керинг
Пользователь
Ранг: 5


12.05.2006 // 10:29:28     
"...по отдельным компонентам и выслать, скажите только по каким и куда."
рибоза, ксилоза, фруктоза, манноза, сорбоза, глюкоза, сахароза...agata333@yandex.ru.
Да насчет заполненный, пучтой лайнер немного непонятно, я его разбирал там пусто
чем заполнять
заранее спасибо.
Perepelkin_K
Пользователь
Ранг: 3


12.05.2006 // 10:47:36     
Редактировано 1 раз(а)

когда говорил по каким - я имел ввиду по каким силилирующим агентам, т.к. они различаются по активности и условиям проведения силилирования.
Пустой лайнер применяют в случаях очень лабильных (легко разлагающихся), сорбирующихся соединений, тогда когда использование любой насадки в лайнере вносит изменения в качественный и количественный состав пробы. Однако, в случае прямого пустого лайнера из-за нестабильного процесса испарения пробы от ввода к вводу (неполного испарения, неравномерного перемешивания с газом-носителем, прочее) абсолютные отклики пиков компонентов могут значительно различаться в параллельных определениях. Поэтому или стараются использовать пустые лайнера сложной формы или заполнение лайнера. В вашем случае можно использовать либо силанизированную стекловату, либо стеклянные шарики, но желательно все же убедиться что влияние насадки лайнера отсутствует или не очень значительно.
Напишите мне какие у вас есть силилирующие агенты, чтобы я отсканировал инфу по ним для вас.
Да, а испаритель на вашем хроматографе какой версии?
Керинг
Пользователь
Ранг: 5


12.05.2006 // 11:13:59     
силилирующий агент BSA, с испарителем сложнее стандартный с делителем потока..
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Ассоциация аналитических центров «Аналитика» Ассоциация аналитических центров «Аналитика»
Ассоциация объединяет специалистов в области прикладной аналитической химии и работает под эгидой Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации (Ростехрегулирование) и Научного Совета по аналитической химии РАН (НСАХ РАН). В Ассоциацию входит более 130 членов - лабораторий отраслевых и академических институтов, ВУЗов, организаций Ростехрегулирования, предприятий различных форм собственности.
Perepelkin_K
Пользователь
Ранг: 3


12.05.2006 // 14:17:48     
Редактировано 1 раз(а)


рибоза, ксилоза, фруктоза, манноза, сорбоза, глюкоза, сахароза...agata333@yandex.ru.

Попытался отправить письмо, сервер ругается, говорит нет такого адреса.

кстати, и в паспорте на BSA и в каталоге FLUKA не рекомендуют использовать данный агент для силилирования сахаров.
Керинг
Пользователь
Ранг: 5


12.05.2006 // 22:50:26     
не рекомендуется BSA, а что рекомендуют еще один адресок genetik007@yandex.ru
Керинг
Пользователь
Ранг: 5


12.05.2006 // 22:55:04     
если можно есть какие нибудь ссылки по силилированию и использованию силилирования в газовой хроматографии...
valerra
Пользователь
Ранг: 131


13.12.2006 // 0:27:22     
Определение сахаров.По 10 мкл раствора модельной смеси и 10 мкл раствора препарата попеременно хроматографируют на газовом хроматографе типа «Вариан 3700» с пламенно-ионизационным детектором, получая не менее 5 хроматограмм для каждого из анализируемых образцов в следующих условиях:
Колонка – стальная длиной 2 м с внутренним диаметром 2 мм.
Носитель – Инертон AW 0,315 – 0,400 мм.
Фаза –5% SE-30.
Газ-носитель – азот. Расход газа-носителя – 30 мл/мин.
Водород – 30 мл/мин.
Воздух – 300 мл/мин.
Температура испарителя – 320 оС.
Температура детектора – 320 оС.
Температурный режим термостата: градиент со 150 оС до 320 оС со скоростью 10 оС в минуту.
Методика силиирования Max777 описана хорошо (взята из сборника «Методы исследования углеводов»), всего несколько уточнений: 100 мг сухих сахаров в описанных условиях за 30 мин не силиируются полностью, я беру обычно не более 35-40 мг – для прибора полученной концентрации хватает выше крыши.
От внутреннего стандарта (фенилпиранозид) я отказался – лень взвешивать, а никакой разницы в точности определения не увидел. Использую его для проверки хроматографической системы (если у вас есть такое требование к оформлению методики) – для описанных выше условий эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику фенил-β-D-глюкопиранозида должна составлять не менее 1800 теоретических тарелок, коэффициент асимметрии пиков должен составлять не менее 0,90 и не более 1,20. (расчтанный по ГФXI).
Растворять навеску сахаров при нагревании не обязательно – можно просто оставить на ночь. При силиировании надо не просто интенсивно встряхивать 30 мин, а встряхивать периодически секунд по 10-20 каждые 10 минут, и после каждого встряхивания приоткрывать пробку, ибо будет выделяться газ. Если его не спускать, то выбьет пробку. Лично я силиирую в пенициллиновых флакончиках, пробки приматываю сверху полоской скотча, получается неплохо.
Стандартные образцы сахаров лучше брать в виде моногидратов, ибо ангидриды (особенно ангидрид глюкозы) довольно неохотно растворяются в пиридине, даже при нагревании.
Калибровать надо после каждых 5-8 определений, т.к. детектор довольно быстро обрастает оксидом кремния, при этом чувствительность к разным сахарам меняется незакономерно (даже относительно фенилпиранозида).
Мерить пики по высотам категорически нельзя – результаты получаются обычно завышенные на 5 – 30%.
Колонку использую набивную – страшновато брать капилляр под силиирующий агент и трифторуксусную кислоту – однажды я заколол растворчик хлорной кислоты в НР-35% и долго удивлялся, глядя на дикие пики, из нее выходящие. Потом прочитал, что силиконы плохо реагируют на кислоты.
Фаза подошла – SE-30, пробовал также DC-550 (выходили только моносахариды) и OV-101 (вообще ничего толком не получилось, но, возможно потому, что старая была). Тетрасахаридную фракцию в патоке я так и не смог увидеть, хотя на ТСХ она определялась.
По этой методе определял в крахмальных гидролизатах, кровезаменителях и в таблетках: глюкозу, фруктозу, сахарозу, мальтозу, мальтотриозу, сорбит, инозит, а также лимонную и винную кислоты.

  Ответов в этой теме: 9

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты