Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

HPLC >>>

  Ответов в этой теме: 9

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: HPLC
khrushh
Пользователь
Ранг: 70

11.05.2006 // 18:06:46     
Требуется разделить пептиды. Обратнофазка в градиенте не помагает. хотелось бы попробовать катионообменник но при элюции соль буфера весь сигнал забьёт т.к. детекция на 226 (нет ароматики)
Может кто нибудь помочь моему горю?
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
pumatnv
Пользователь
Ранг: 55


11.05.2006 // 18:18:32     
Странно, что обращенка не помогла... А в каких условиях Вы делали - колонка, режим элюции, элюент?
khrushh
Пользователь
Ранг: 70


11.05.2006 // 18:33:22     

pumatnv пишет:
Странно, что обращенка не помогла... А в каких условиях Вы делали - колонка, режим элюции, элюент?
Колонка Separon C18 3 на 150 мм, 226 nm, градиент ацетонитрила от 0 до 100%, за 40 мин, поток 0,8 мл/мин. Пробовали менять градиент (делать более пологим) ничего принципиально не меняется. Пептид содержит много лизина поэтому и хочу попробовать на ионообменнике
Волгин
VIP Member
Ранг: 1311


11.05.2006 // 18:59:25     
Ваще-то обычно добавляют или от 0,05 до 0,1% трифторуксусной кислоты или фосфатного буфера с различным рН и концентрацией и, варьируя все это, добиваются искомого результата. Кроме того, стекляшки (насколько я понимаю)с Сепароном - не лучший вариант для разделения пептидов. Попробуйте другие С18 и С8 колонки. Кроме того, можно попробовать фенильную или С10СN фазу - у них иная селективность.
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


11.05.2006 // 19:40:27     

Несколько неудачное решение в посте автора, но в целом ситуация ясная - действительно, мучаться неохота, раз сразу не вышло

Ну, тут для поклонника чеховских колонок ясно что делать. Берите те же Сепароны, но те, которые аминофазы. Берите просто смесь ацетонитрила с водой. Не заморачивайте себя и всех остальных градиентами, работайте в изократе (заодним и длину волны можно уменьшить до 205нм). Начните с 30% воды в элюенте, и убавляйте ее до тех пор, пока не будет нужного разделения (думаю, где-то в районе 15% это случится).
Если поприкалываться с этой системой дальше (бывают люди со свободным временем и чувством юмора), можете прочитать статью Леонида (в журнале на форуме) по динамического модифицированию и вбухнуть туда же перхлората лития - можете получить разнообразные разделения вплоть до самых невероятных

А можно и сильный ионообменник, лучше на основе силикагеля, да и стоит он дешево. И спокойно добавляйте соль... фосфаты, трифторацетаты, перхлораты и прочие прозрачны в этом диапазоне...
khrushh
Пользователь
Ранг: 70


11.05.2006 // 20:15:41     
To Волгин
Я бы с рабостью, да из обратнофазных только с8 и с18... А ТФУ я конечно добавляю

То КонстантинС
Вы имеете ввиду слабоосновные типа сепарон CN?
А будут ли они эффективны у меня ведь высокоосновный пептид?
Да и для такой длины волны боюсь придется с загашника ацетонитрил доставать мой обычный боюсь поглащать будет...
Фосфаты разве не поглащают на 226??
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Ассоциация аналитических центров «Аналитика» Ассоциация аналитических центров «Аналитика»
Ассоциация объединяет специалистов в области прикладной аналитической химии и работает под эгидой Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации (Ростехрегулирование) и Научного Совета по аналитической химии РАН (НСАХ РАН). В Ассоциацию входит более 130 членов - лабораторий отраслевых и академических институтов, ВУЗов, организаций Ростехрегулирования, предприятий различных форм собственности.
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


11.05.2006 // 21:24:46     

Аааааа... не в солях, значит, дело, а в общелабораторском помойном ацетонитриле так и скажите... Могу дать маленки, но отшень полесны софетт - добавить в него 20% воды и с хорошим дефлегматором отогнать чистейший азеотроп, коий и использовать как основу элюентов (а может и приторговывать ).

Начет теории не волнуйтесь, просто сделайте по прописи (вот там, выше) - и все получится. Только не надо никакого нитрила, возьмите аминофазу (NH2). Если уж нет аминофазы, то просто силикагель.

Если ж пептид выскоосновный, то г-н Волгин может набить Вам колоночку карбокси-силикагелем, на котором можно работать на обычных водных буферах, опускаясь хоть до 200нм (просто буфер надо подержать над активированным углем), и получая кучу опыта варьированием ионной силы и рН (только не перестарайтесь, условия должны быть мягкими).
G.Baram
VIP Member
Ранг: 211


12.05.2006 // 10:31:01     
Редактировано 1 раз(а)


khrushh пишет:
Требуется разделить пептиды. Обратнофазка в градиенте не помагает. хотелось бы попробовать катионообменник но при элюции соль буфера весь сигнал забьёт т.к. детекция на 226 (нет ароматики)
Может кто нибудь помочь моему горю?

В качестве соли можно взять перхлорат лития. Даже его 4М раствор прозрачен до 200 нм. Годится и перхлорат натрия. Работать лучше при рН 2.5. Подкислять хлорной кислотой.
khrushh
Пользователь
Ранг: 70


12.05.2006 // 11:22:04     

Бедность не порок, уважаемый КонстантинС
Про азеотроп вы дело говорите, надо попробовать
Карбокси-силикагель это интересно, укажите пожалуйста если не сложно торговые названия, а карбокси метил целлюлоза или её фосфат подойдет?
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


15.05.2006 // 9:53:34     

Не, мне чего-то в последнее время кажется, что порок... совсем испортился

Ну, название Диасорб Карбокси, соответственно, БиоХимМак, вот...

  Ответов в этой теме: 9

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты