Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Очистка колонки >>>

  Ответов в этой теме: 11
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Очистка колонки
mariademia
Пользователь
Ранг: 5

07.08.2019 // 15:50:39     
Доброго дня, занимаюсь определением бензойной и сорбиновой кислот в молочных продуктах методом ВЭЖХ по методике МВИ.МН 806-98, метод основан на экстракции консервантов водой с применением реактивов карреза. В последнее время столкнулась с проблемой повышения давления на колонке, пробовала промывать противотоком смесью изопропанол-вода 1:1, раздвоились пики. Элюент: изократика 92%-калий фосфатный буфер 0.025М, рН 6.0; 8%-80% водный ацетонитрил. Хроматограф Agilent 1200, колонка кромасил 100С8 4,6*250 мм. Подскажите, В чем может быть проблема и каким образом можно почистить колонку?
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
darkkiss
Пользователь
Ранг: 85


07.08.2019 // 21:45:37     
У аквилона есть методичка, где прописаны разные варианты варианты: ftp://ftp.akvilon.su/manuals/HPLC%20columns%20manual.pdf
SergeyK
Пользователь
Ранг: 1851


08.08.2019 // 10:34:42     
Редактировано 2 раз(а)

Очистка зависит от того, чем загрязнена колонка. В перевернутом состоянии колонки хроматограмма лучше или такая же? Если лучше, может входной фрит забит, работайте на перевернутой, лучше фильтруйте пробы, ждите дольше до фильтрации. Если не лучше, а такая же, это скорее объемное загрязнение, может протеинами.
Я пока ставлю на проброс протеинов. Чистить так:
hplctips.blogspot.com/2016/10/notes-on-cleaning-bound-protein-from-rp.html?m=1
Если не поможет, приходите, ещё подумаем.
Если это неподвижная фаза растворилась, поможет только замена колонки или разборка колонки и добивка фазы под фрит. Растворение силикагеля возможно, т.к. если склероз мне не изменяет, то ацетонитрил защелочит ваш фосфатный буфер чуть ли не до 8 при повышении градиента.
Avet
Пользователь
Ранг: 734


08.08.2019 // 11:50:10     

SergeyK пишет:
Очистка зависит от того, чем загрязнена колонка. В перевернутом состоянии колонки хроматограмма лучше или такая же? Если лучше, может входной фрит забит, работайте на перевернутой, лучше фильтруйте пробы, ждите дольше до фильтрации. Если не лучше, а такая же, это скорее объемное загрязнение, может протеинами.
Я пока ставлю на проброс протеинов. Чистить так:
hplctips.blogspot.com/2016/10/notes-on-cleaning-bound-protein-from-rp.html?m=1
Если не поможет, приходите, ещё подумаем.
Если это неподвижная фаза растворилась, поможет только замена колонки или разборка колонки и добивка фазы под фрит. Растворение силикагеля возможно, т.к. если склероз мне не изменяет, то ацетонитрил защелочит ваш фосфатный буфер чуть ли не до 8 при повышении градиента.

Сергей, рН от 6,0 до 8 при увеличении % ацетонитрила, по-моему, очень круто. Я таких драматических перескоков не встречал. Ну на 1 единицу, не более, ведь ацетонитрил - апротонный растворитель, и на изменение рН влияет опосредованно и не резко.
mariademia
Пользователь
Ранг: 5


08.08.2019 // 13:07:09     
Спасибо большое за совет. Насчёт очистки экстракта, пробовали дольше отстаивать, фильтруем через разные фильтры и центрифугируем, проблема не уходит. В обратном положении не пробовала снимать хроматограммы.
mariademia
Пользователь
Ранг: 5


08.08.2019 // 13:12:26     
Подскажите, это поможет убрать проблему раздвоения пиков?
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Высокотемпературная лабораторная электропечь SNOL 8,2/1100 Высокотемпературная лабораторная электропечь SNOL 8,2/1100
Электропечь SNOL 8,2/1100 предназначена для сушки и термообработки различных материалов в воздушной среде при температуре от 50 °С до 1100 °С. Рабочая камера электропечи выполнена из высоко эффективной волокнистой термоизоляции в виде нагревательного блока с вакуумированным нагревательный элементом.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
SergeyK
Пользователь
Ранг: 1851


08.08.2019 // 13:19:13     
Редактировано 3 раз(а)

Наоборот, в метаноле на 1 pKa выше, при 50% метанола, в ацетонитриле и при 80% будет выше, чем на 1 pKa. Пруф в импортном учебнике лень искать.
Larger changes are observed for acetonitrile
https://www.nestgrp.com/pdf/LCGC/MPB_I_Tindall.pdf
Если хотите проверить экспериментально, у того же меттлера есть электроды для органических сред.
Serg87
Пользователь
Ранг: 7


09.08.2019 // 2:59:20     

mariademia пишет:
Подскажите, это поможет убрать проблему раздвоения пиков?
поставьте другую колонку, если на ней пики не будут двоиться, значит первую можно выкидывать, т.к. в ней образовалась полость во время промывки обратным током.
SergeyK
Пользователь
Ранг: 1851


09.08.2019 // 9:31:14     
Редактировано 1 раз(а)

По моему скромному опыту, современные колонки пакуются под таким давлением и с использованием таких технологий, что образование полости только под влиянием подключения противотоком, без растворения фазы, исключено.
Поработайте на колонке противотоком, если пики станут лучше, это фрит, при перевороте колонки влияние такого забития уменьшается, пик успевает размыться в колонке:
www.chromacademy.com/images/tech-tip-column-frit.jpg
Есть шансы, что со временем загрязнение растворится, повернёте обратно. Из рисков: если плохо чистите пробы, забьёте оба фрита.
Придётся разбирать колонку, но проще новую купить, т.к не факт, что вы её сможете собрать для долговременной работы, придётся периодически опять разбирать и подмазывать сорбент под фрит, это колхоз.
И забитый фрит и образование полости в колонке выглядят одинаково на хроматограмме:
Причины:
quimica.udea.edu.co/~carlopez/cromatohplc/peak_shape1.gif
Следствия, сначала это плечо, потом это дублет:
www.chromedia.org/dchro/gfx/ZclwhasHaB.jpeg
mariademia
Пользователь
Ранг: 5


09.08.2019 // 18:21:08     

SergeyK пишет:
По моему скромному опыту, современные колонки пакуются под таким давлением и с использованием таких технологий, что образование полости только под влиянием подключения противотоком, без растворения фазы, исключено.
Поработайте на колонке противотоком, если пики станут лучше, это фрит, при перевороте колонки влияние такого забития уменьшается, пик успевает размыться в колонке:
www.chromacademy.com/images/tech-tip-column-frit.jpg
Есть шансы, что со временем загрязнение растворится, повернёте обратно. Из рисков: если плохо чистите пробы, забьёте оба фрита.
Придётся разбирать колонку, но проще новую купить, т.к не факт, что вы её сможете собрать для долговременной работы, придётся периодически опять разбирать и подмазывать сорбент под фрит, это колхоз.
И забитый фрит и образование полости в колонке выглядят одинаково на хроматограмме:
Причины:
quimica.udea.edu.co/~carlopez/cromatohplc/peak_shape1.gif
Следствия, сначала это плечо, потом это дублет:
www.chromedia.org/dchro/gfx/ZclwhasHaB.jpeg

а можно ли работать противотоком с давлением 150-160 бар?
SergeyK
Пользователь
Ранг: 1851


09.08.2019 // 21:01:03     
Редактировано 5 раз(а)

Направление колонки с силикагелем показывает в каком направлении она была набита на заводе, при работе противотоком можно ожидать снижения эффективности на до 10-15% в теоретических тарелках. Обычно оно вообще незаметно.
На этом всё.
blog.sepscience.com/liquidchromatography/back-flushing-an-hplc-column?hs_amp=true
Это Джон Долан отвечает.
www.chromatographyonline.com/34-years-lc-troubleshooting-interview-john-dolan-0

  Ответов в этой теме: 11
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты