| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Техника гельпроникающей хроматографии >>>
|
 |
| Автор | Тема: Техника гельпроникающей хроматографии | ||
|
Наташа Пользователь Ранг: 33 |
 14.01.2004 // 12:27:13
Здравствуйте. Впервые столкнулась с необходимостью практического применения гельпроникающей хроматографии, поэтому появились различные вопросы, связанные именно с тем, как проводить работу руками. Можно ли в какой-либо литературе найти ответы на следующие вопросы: 1. Каким образом выбирается низкомолекулярный маркер для колонки? Так как с высокомолекулярным все определились (голубой декстран), то по низкомолекулярному маркеру есть различные данные, и притом используются такие соединения, которых нет в продаже. 2. Какие именно концентрации калибровочных декстранов и в каких количествах готовить? 3. В каком количестве наносить калибровочные растворы и определяемое вещество для определения ММ распределения? |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
14.01.2004 // 15:43:45
Смотря какая колонка (или набор колонок), какие массы нужно откалибровать. В качестве ММ полного проницания легко подойдет ацетон. Концентрации зависят от ММ и типа детектора, диаметра и длины системы колонок, чем более высокое ММ, тем меньше концентрация в стандарте. Потом, гель-хроматография, скорее хроматография размеров молекул, а не ММ. Поэтому, что собираешься определять, тем и калибруешь. В вопросе слишком мало конкретики, чтоб нормально на него ответить. |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
14.01.2004 // 15:49:03
Легко. 1. Стыскин Е. Л., Ициксон Л. Б., Брауде Е. В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. М.: Химия, 1986. 2. Остерман Л. А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М.: Наука, 1985. Наверно, что-то и посвежее есть. Но и этого за глаза. Другое дело, что есть "веревки", о которых не пишут в книгах. |
||
|
Наташа Пользователь Ранг: 33 |
14.01.2004 // 16:41:49
А что именно нужно конкретизировать? |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
14.01.2004 // 17:09:18
1. Что собираетесь делить (белки, полисахариды, ДНК-овые праймеры, плазмиды и т.д.) и откуда. 2. На чем собираетесь делить (TSK-гель для ВЭЖХ или аналогичные и какие размеры, или сами заполняете колонки 60-90 см (какого диаметра?) (Sephadex, Sephacryl, Sepharose или иное?) 3. Чем собираетесь детектировать? |
||
|
Наташа Пользователь Ранг: 33 |
14.01.2004 // 17:22:39
Редактировано 2 раз(а) Полиэтиленликоль из водного раствора Колонки заполнять сами Sephadex G-75 Скорее всего УФ |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Наташа Пользователь Ранг: 33 |
14.01.2004 // 17:25:31
Спасибо за литературу |
||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
15.01.2004 // 15:15:34
Здравствуйте, Наташа! Конечно, для ответа на Ваши первые вопросы надо написать мальнькую книжку  Сначала действительно почитайте, что есть, чем, говорится, богаты.Я просто хотел заметить, что ПЭГ из воды неоптимально делить методом гель-фильтрации на Сефадексе - долго, муторно, черезвычайно неэффективно, особенно при заполнении вручную. Если речь бы шла об аналитике - я бы сказал - анализируйте обращенно-фазовой хроматографией, а не гель-фильтрацией, градуируйте по стандартам ПЭГ (они дорогие, но легко приобретаемые). Но если Вам нужно наработать препаративно - это другой вопрос. |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
15.01.2004 // 15:59:22
Действительно, муторно будет. Но первым делом, УФ-не подойдет, ничего не увидите. Абсолютно. Нужен рефрактометр, как минимум. (как максимум- ELSD)/Sephadex 75 даст один широкий пик, у которого можно будет только рассчитать ММР. Да и то, маловероятно. Убейте меня, но я так ничего и не понял. Нарабатывать ПЭГи с узким ММР, что ли? Объясните таинственный смысл задачи. |
||
|
Наташа Пользователь Ранг: 33 |
16.01.2004 // 9:26:11
Редактировано 2 раз(а) Простите, что сразу его не объяснила. В лекарственном препарате инфузионного действия как один из компонентов используется полиэтиленгликоль 20000, в нормативную документацию для этого препарата необходимо внести определение молекулярной массы, а при разработке показать молекулярно-массовое распределение ПЭГ. Соответсвенно, что бы внести в ФС определение молекулярной массы с использованием вискозиметрии (что предпочтительнее для рутинного анализа, чем хроматография) необходимо сделать определение Мм м ММ распределения абсолютными методами. Наиболее близкий к нам это гельпроникающая хроматография. Т. к. для препарата в состав которого входил желатин, нам ее делали. Сейчас начальство решило, что очень просто самим определять Мм этим способом. Почему УФ - есть способ количественного определения ПЭГ с использованием Спектрофотометрии, сложность заключается только в том, что каждую пробу надо будет подготавливать |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
16.01.2004 // 10:24:32
Вот в этом и вся какава. Сделать ММР на Сефадексе можно, но систему нужно предварительно откалибровать, желательно стандартами ПЭГа с узким ММР. Как это сделать без рефрактометра- не знаю. Если только отбирать каждую фракцию, через модификацию и на УФ? И кроме ПЭГ-20М в пробе ничего. |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
