Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ: проблема >>>

  Ответов в этой теме: 15
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Avet
Пользователь
Ранг: 1071


25.07.2017 // 9:05:36     

OldBrave пишет:

Avet пишет:...

Брошу 5 копеек..
1. Обязательно использовать предколонку.
2. Поскольку промывка чистым ACN к успеху не привела, очевидно на колонке сидят водорастворимые ВМС(???) и, следовательно промывать от них следует 5-10% водным ACN при повышенной температуре с последующим градиентом до рабочего элюента.
Уважаемый OldBrave! Предколонка применяется (описано в ответе г-ну Волгину), причем "съедает" 2000 т.т. По промывке большой концентрацией водной фазы - это хорошая мысль, стоит попробовать, спасибо.
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Avet
Пользователь
Ранг: 1071


25.07.2017 // 9:08:38     

AA_Alex пишет:

OldBrave пишет:

Avet пишет:...

Брошу 5 копеек..
1. Обязательно использовать предколонку.
2. Поскольку промывка чистым ACN к успеху не привела, очевидно на колонке сидят водорастворимые ВМС(???) и, следовательно промывать от них следует 5-10% водным ACN при повышенной температуре с последующим градиентом до рабочего элюента.

А что за ВМС у вас? Попробуйте промыть ацетонитрилом/водой с 0,05 или 0,1% трифторуксусной к-той градиентом с 5-10% ацетонитрила до 100 и обратно 2-3 раза, потом отмойте от кислой ПФ и проверьте.
Уважаемый AA_Alex! Промывать чем-то кислым стрёмно, так как фенильная колонка, не самого последнего поколения, поэтому в кислых средах эти колонки имеют ограничесния в использовании.
AA_Alex
Пользователь
Ранг: 371


25.07.2017 // 10:16:24     

Уважаемый AA_Alex! Промывать чем-то кислым стрёмно, так как фенильная колонка, не самого последнего поколения, поэтому в кислых средах эти колонки имеют ограничесния в использовании.

Да ну, для этой колонки рабочий диапазон рН 2-7.5. Такой же у большинства С18, работаем на них в градиенте с 0.1% ТФУ. Ну если боитесь - возьмите муравьинку или уксусную.
Волгин
VIP Member
Ранг: 1324


25.07.2017 // 23:57:44     
Редактировано 1 раз(а)

Попробую привести свои соображения. За их непогрешимость отвечать не берусь, поскольку много неясного. 1. Если Вы используете предколонку, то промывать основную колонку в обратном направлении я бы не советовал. Поскольку очень уж сильно удерживающиеся примеси должны задерживаться предколонкой. Кроме того, сорбент в любой колонке, используемой достаточно долго, хоть немного, но проседает. Пусть даже на 0,1 мм. Промывка в обратном направлении может стронуть слой сорбента в любом месте колонки с образованием каверны неизвестной конфигурации. Не факт, что дальнейшая работа в прямом направлении полностью закроет эту каверну. Кроме того, при движении слоя сорбента вдоль колонки неизбежно повредится пристеночный слой. И от раза к разу этот эффект будет усиливаться.
Я бы стал промывать колонку изопропанолом, но так, чтобы давление не превышало 100 бар. Конечно в прямом направлении. (Да, это довольно долго. Но стоит того.) И при сильном ухудшении разделения домазывал бы верхнюю часть колонки сорбентом из выпакованной аналогичной колонки (убитой ранее).
2. Предколонка. Вот ее можно и нужно промывать в обратном направлении. Так как описано в предыдущих постах уважаемых участников обсуждения. И именно ее менять почаще при катастрофическом ухудшении разделения. То есть порядок такой: колонку после промывки тестируете по любому чистому стандарту, хоть в соответствии с тест-хроматограммой, прилагаемой производителем, хоть просто по бензолу. При необходимости домазываете, снова тестируете, потом собираете с предколонкой и уже систему проверяете в соответствии с валидацией. Если не проходит, меняете предколонку. Если опять не проходит, тогда уж, скрипя зубами и ругая меня, всю систему.
3. Выпаковка старой колонки. Только в обратную сторону и отбросив примерно 5 см от начала. Остатка Вам должно хватить очень надолго.
4. Домазка колонки. К выпакованному сорбенту добавляете изопропанол так, чтобы получилась творогообразная субстанция. Её наносите шпателем на конец открытой колонки с небольшой горкой (0,1-0,5 мм). Затем ЧИСТЫМ ПАЛЬЦЕМ очищаете металл конца колонки (торец и с боков) и закручиваете фиттинг. Без фанатизма. Это в том случае, если колонка "классической конструкции" с металлическим конусом. Если фиттинг накручивается прямо на трубку и фильтр внутри последней, все гораздо сложнее и приходится извращаться. Да, я бы еще посоветовал в случае "классической конструкции" на стык трубки с конусом намотать пару слоев ленты ФУМ. Дополнительно загерметизирует и чуть-чуть уменьшит мертвый объем.
Почему чистым пальцем. Опыт показал. что другие материалы снимают излишек сорбента хуже.
ЗЫ Если основная колонка просела больше, чем на 3 мм, смысла восстанавливать нет. Не получится.
Avet
Пользователь
Ранг: 1071


26.07.2017 // 10:36:39     
Благодарю Вас, господин Волгин! Попробуем то, что в наших силах и возможностях,

  Ответов в этой теме: 15
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты