Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ: высота пика для методики количественного определения >>>

  Ответов в этой теме: 7

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: ВЭЖХ: высота пика для методики количественного определения
Avet
Пользователь
Ранг: 844

04.11.2016 // 14:21:38     
Уважаемые коллеги? Есть ли информация, в каких границах должна быть высота пика для методики количественного определения?
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
vmu
Пользователь
Ранг: 483


04.11.2016 // 16:18:48     
Она должна быть таких границах, которые позволят проводить анализ с требуемой в рамках решаемой задачи точностью.
Avet
Пользователь
Ранг: 844


04.11.2016 // 16:39:59     

vmu пишет:
Она должна быть таких границах, которые позволят проводить анализ с требуемой в рамках решаемой задачи точностью.
Могу ли просить Вас детализировать?
ATem
Пользователь
Ранг: 625


04.11.2016 // 17:50:18     
Что-то мне подсказывает, что речь идет о пределе определения и пределе детектирования. Если это так - то лучше взять рекомендации ИЮПАК, например, и почитать. В ЖАХе и "Аналитике и контроль" публиковались когда-то рекомендации, в которых не только эти понятия были прописаны, но и многие другие. Лучше начать с этого, если я правильно Вас понял.
vmu
Пользователь
Ранг: 483


06.11.2016 // 10:58:47     
Редактировано 1 раз(а)

Выбираете условия анализа, определяете метрологические характеристики (правильность, воспроизводимость, линейность) в выбранных условиях. Если все устраивает, значит, высота пика в нужных границах. Предел определения (LOQ - limit of quantitation) - это ориентир, ниже которого не надо спускаться.

Что такое LOQ? Если рассмотреть его определение как LOQ = 10s/b, где s - стандартное отклонение сигнала, b - коэффициент чувствительности, то LOQ - эта та концентрация, при которой RSD сигнала составляет 10%. (Соответственно, для предела обнаружения LOD = 3.3s/b имеем RSD сигнала 30%.)

Если определять LOQ как концентрацию, при которой отношение высоты пика H и размаха колебаний фонового сигнала h (или половины этого размаха, т.е. амплитуды (h/2), как это делается в Европейской фармакопее и в ГФ 13) равно 10 (для LOD - равно 3), то величина LOQ тоже будет соответствовать какому-то значению RSD сигнала, принимаемому за максимально допустимое.

Если погрешность анализа определяется только шумом фонового сигнала, и RSD порядка 5-10% приемлемо, то можно и высоты пиков порядка высоты LOQ использовать. Другое дело, когда требуется более высокая точность. Тогда стараются найти условия, при которых высота пика будет побольше.
Avet
Пользователь
Ранг: 844


07.11.2016 // 16:37:46     

vmu пишет:
Выбираете условия анализа, определяете метрологические характеристики (правильность, воспроизводимость, линейность) в выбранных условиях. Если все устраивает, значит, высота пика в нужных границах. Предел определения (LOQ - limit of quantitation) - это ориентир, ниже которого не надо спускаться.

Что такое LOQ? Если рассмотреть его определение как LOQ = 10s/b, где s - стандартное отклонение сигнала, b - коэффициент чувствительности, то LOQ - эта та концентрация, при которой RSD сигнала составляет 10%. (Соответственно, для предела обнаружения LOD = 3.3s/b имеем RSD сигнала 30%.)

Если определять LOQ как концентрацию, при которой отношение высоты пика H и размаха колебаний фонового сигнала h (или половины этого размаха, т.е. амплитуды (h/2), как это делается в Европейской фармакопее и в ГФ 13) равно 10 (для LOD - равно 3), то величина LOQ тоже будет соответствовать какому-то значению RSD сигнала, принимаемому за максимально допустимое.

Если погрешность анализа определяется только шумом фонового сигнала, и RSD порядка 5-10% приемлемо, то можно и высоты пиков порядка высоты LOQ использовать. Другое дело, когда требуется более высокая точность. Тогда стараются найти условия, при которых высота пика будет побольше.

Благодарю за комментарий, но у меня есть вопросы: указанные Вами метрологические характеристики - это на самом деле валидационные характеристики. Т.е. Вы предлагаете вначале провести валидацию методики? Но какая связь правильности, воспроизводимости, линейности с величиной LOQ? Если возможно, уточните, что Вы имеете ввиду.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Химмед Химмед
Официальный дистрибутор ведущих компаний, таких как Merck, Acros Organics, Calbiochem, Fluka, IKA, Labscan, Roth, Sigma-Aldrich. Supelco, ОАО "Химлаборприбор" и др.
vmu
Пользователь
Ранг: 483


07.11.2016 // 23:19:24     
Метрологические характеристики - они и в Африке метрологические, и то, что они являются частью валидационных параметров не делает их "на самом деле валидационными".

Я не предлагаю вначале провести валидацию методики. Вначале методика (а не некий минимум условий анализа) должна быть разработана, чтобы было что валидировать. По-хорошему, валидация - это "выпускной экзамен" для методики, формальная процедура проверки выполнимости заявленных характеристик методики. А для того чтобы можно было что-то "заявить", характеристики должны быть определены при разработке методики. Сначала - аналитическая задача, затем - методика с характеристиками, подходящими для решения этой задачи, а уж затем - формальная, в идеале независимая процедура подтверждения характеристик методики (валидация). На практике понятия разработки и валидации методики мешаются в одну кучу, и данные, полученные при разработке методики, предвалидационных исследованиях, фактически становятся валидационными данными.

Как связан LOQ (а точнее высота пика, с которой и начался разговор) с воспроизводимостью (а точнее с частным случаем этого взятого тут в широком смысле понятия - повторяемостью), я фактически уже объяснил. При прочих равных условиях, чем выше пик по сравнению с шумом фонового сигнала, тем меньше RSD (лучше повторяемость) аналитического сигнала (т.е. той же самой высоты пика, либо площади пика). LOQ - это минимальная в конкретных условиях анализа концентрация, ниже которой повторяемость величины аналитического сигнала становится неприемлемой, для того чтобы считать анализ "количественным".

Слишком высокие пики тоже неприемлемы, т.к. есть динамический диапазон детектора, есть линейный диапазон (а ведь мы хотим, чтобы отклик был линейным, не так ли?), есть перегрузка хроматографической колонки при высоких концентрациях или больших объемах пробы... LOQ сам по себе с линейностью не связан. Высота пика, которую мы обсуждаем, связана.

Что касается правильности, то при концентрациях порядка LOQ с правильностью тоже могут быть проблемы. Допустим, например, что одновременно с целевым компонентом анализируемого образца элюируется примесь. Если пик примеси достаточно высокий, а пик аналита достаточно низкий, то аналит правильно не определите. Потом взяли поменяли длину волны детектирования - пик примеси стал пренебрежимо мал, а пик аналита нормальной высоты. Вот и нашли высоту пика, обеспечивающую правильность анализа...
Avet
Пользователь
Ранг: 844


08.11.2016 // 13:18:58     

vmu пишет:
Метрологические характеристики - они и в Африке метрологические, и то, что они являются частью валидационных параметров не делает их "на самом деле валидационными".

Я не предлагаю вначале провести валидацию методики. Вначале методика (а не некий минимум условий анализа) должна быть разработана, чтобы было что валидировать. По-хорошему, валидация - это "выпускной экзамен" для методики, формальная процедура проверки выполнимости заявленных характеристик методики. А для того чтобы можно было что-то "заявить", характеристики должны быть определены при разработке методики. Сначала - аналитическая задача, затем - методика с характеристиками, подходящими для решения этой задачи, а уж затем - формальная, в идеале независимая процедура подтверждения характеристик методики (валидация). На практике понятия разработки и валидации методики мешаются в одну кучу, и данные, полученные при разработке методики, предвалидационных исследованиях, фактически становятся валидационными данными.

Как связан LOQ (а точнее высота пика, с которой и начался разговор) с воспроизводимостью (а точнее с частным случаем этого взятого тут в широком смысле понятия - повторяемостью), я фактически уже объяснил. При прочих равных условиях, чем выше пик по сравнению с шумом фонового сигнала, тем меньше RSD (лучше повторяемость) аналитического сигнала (т.е. той же самой высоты пика, либо площади пика). LOQ - это минимальная в конкретных условиях анализа концентрация, ниже которой повторяемость величины аналитического сигнала становится неприемлемой, для того чтобы считать анализ "количественным".

Слишком высокие пики тоже неприемлемы, т.к. есть динамический диапазон детектора, есть линейный диапазон (а ведь мы хотим, чтобы отклик был линейным, не так ли?), есть перегрузка хроматографической колонки при высоких концентрациях или больших объемах пробы... LOQ сам по себе с линейностью не связан. Высота пика, которую мы обсуждаем, связана.

Что касается правильности, то при концентрациях порядка LOQ с правильностью тоже могут быть проблемы. Допустим, например, что одновременно с целевым компонентом анализируемого образца элюируется примесь. Если пик примеси достаточно высокий, а пик аналита достаточно низкий, то аналит правильно не определите. Потом взяли поменяли длину волны детектирования - пик примеси стал пренебрежимо мал, а пик аналита нормальной высоты. Вот и нашли высоту пика, обеспечивающую правильность анализа...

Благодарю за разъяснение, в целом согласен.

  Ответов в этой теме: 7

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты