| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Витамин В6 и др. водорастворимые >>>
|
 |
| Автор | Тема: Витамин В6 и др. водорастворимые | |||||
|
Никита Пользователь Ранг: 59 |
 25.12.2003 // 4:48:55
Редактировано 1 раз(а) Здравствуйте уважаемые! Подскажите пожалуйста как мне эктрагировать водорастворимые витамины, в частности В6(три его формы пиридоксин, пиридоксаль, пиридоксамин, а также 4-пиридоксалевую кислоту) из биоматрикса - сыворотка крови или моча, с последующим ВЭЖХ анализом на С18. Читал, что они окисляются на свету, поэтому все делается в темноте, есть ли другие варианты? В6 полярные вещества, может попробовать смесь эфир:пентанол 3:2 с последующей реэкстракцией? Какой детектор нужен? В японских работах везде используется флю, а можно ли УФ? С уважением, Никита. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
29.12.2003 // 14:45:59
Никита! Анализ водорастворимых витаминов обсосан в форуме, как леденец. Покопайтесь в старых темах по витаминам, там много полезного, особенно в авторстве Романа (один из VIP-членов форума). Экстрагировать эти вещества из водных растворов неплохо хлороформом. Очистка экстракта - удобней всего, перерастворенного в воде на ТФЭ патронах. Света они боятся не больше, чем другие обычные вещества. Если не будете облучать галогенной лампой - ничего с ними не случится. Эти вещества прекрасно поглощают в УФ, более того, имеют характерные УФ-спектры, так что применять флу, как правило, - нет необходимости. Хотя, иногда это удобно, особенно если проба недоочищена, а искомых компонентов очень мало. |
|||||
|
Никита Пользователь Ранг: 59 |
30.12.2003 // 2:26:45
Здравствуйте, уважаемый Леонид! Спасибо, что откликнулись. С наступающим Вас Новым годом! |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
30.12.2003 // 10:41:58
И Вас, Никита, тем же самым по тому же месту!!!    С Новым годом!!!!! |
|||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
08.01.2004 // 16:14:20
И не зря. Если проблема еще не потеряла актуальность, попробую поискать для вас точную ссылку как раз по проблеме В6 и метаболитов в сыворотке. Только там все сложнее. С применением ферментов, осаждением белков, твердофазной экстракцией SPE, и разумеется, флуориметром в качестве детектора. Без этого вы в сыворотке едва ли чего найдете. Ну и проблемку вы себе выбрали. Я вам не завидую. |
|||||
|
Никита Пользователь Ранг: 59 |
13.01.2004 // 6:26:17
Спасибо за ответ. Да, видимо придется работать на флю, т.к. плазменные нормальные концентрации пиридоксальфосфата от 6 до 18 нг/мл. Учитывая такой мизер нужна высокая чувствительность, а клиническое значение vitB6 огромное, он входит в качестве кофермента в состав более чем 100 ферментов в организме человека, но меня более всего интересуют декарбоксилазы нейроаминокислот, т.к. работаю в области нейрохимии. буду ждать А Вы сами давно работаете с водорастворимыми витаминами? В какой области Вы работаете? Я занимаюсь биомедицинской хроматографией, по этому направлению совсем немного работ, так что действительно трудностей хватает. Одно дело экстрагировать вещества из пищевых продуктов, комбикормов, а вот эктракция стероидных гормонов, лекарственных препаратов, витаминов, аминокислот, нейромедиаторов - из сыворотки крови, мочи, спиномозговой жидкости с последующим хром. анализом это сложновато. Все вышеперечисленное составляет мой круг работы, а витамины я пока не освоил. Так что очень бы пригодилась Ваша информация Serga. Буду ждать ответа. Можно в форум, можно на e-mail: biktimer@mail.ru. С уважением, Никита. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Никита Пользователь Ранг: 59 |
13.01.2004 // 6:43:06
Здравствуйте Serga. Спасибо за отклик. Да действительно, учитывая нормальные плазменные концентрации пиридоксальфосфата 6-18 нг/мл, нужно работать с флю. По поводу экстракции пиридоксина, пиридоксаля, пиридоксамина и соответствующих им фосфатов, а также их метаболит в организме человека 4-пиридоксалевую кислоту - у меня нет информации. Есть только метод ультрацентрифугирования у японцев с милипоровскими мембранами, но они очень дорогие и наша лаборатория не потянет. Так что нужен метод экстракции, пусть SPE, сорбент и картриджи есть. Буду рад если Вы поможете в решении этой проблемы. В6 входит в качестве кофермента в более чем 100 ферментов организма человека, но меня более всего интересуют декарбоксилазы нейроаминокислот, т.к. занимаюсь нейрохимией. Я работаю в области биомедицинской хроматографии, работ в этой области мизер. Одно дело экстрагировать и анализировать вещества в пище, комбикормах, а другое дело экстрагировать стероидные гормоны, лек. преператы, аминокислоты, нейромедиаторы из сыворотки крови, мочи, спиномозговой жидкости. Так что трудностей хватает. В6 японцы выделяли методом ультрацентрифугирования после осаждения белков через милипоровский фильтр, но он дорогой и мы не можем его себе позволить, т.к. хотим поставить анализ на рутину. Был бы рад, если бы Вы помогли с SPE B6. А чем Вы занимаетесь? В какой области трудитесь? Мой e-mail: biktimer@mail.ru или через форум. Жду ответа. С уавжением, Никита. |
|||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
14.01.2004 // 16:39:10
Редактировано 2 раз(а) Очень близка к вашей теме работа: B. Botticher, D. Botticher. A new HPLC-Method for the simultaneous determination of B1, B2- and B6- Vitamers in serum and whole blood//International Journal for Vitamin Nutr. Res. 57 (1987) 273-278. Чтоб зря не гонять, скажу. Определяли они с ионными парами (1-гексансульфоновая кислота) на обращенной фазе NovaPack C18 (125 x 4,6 mm), а до того- SPE, опять же на ОФ с ионными парами (Октадецил, 3 ml, Baker-SPE). До SPE освобождали связанные с белками и фосфорилированные формы витаминов ферментативным гидролизом смесью ферментов (они обозвали ее Clara-Diastase, активности не обозначены, Merk). Нашли они (с флуориметром) в сыворотке(в крови) В1- 6,55(62,3), В2-4,92(69,8), В6- 11,21 (59,5) нг/мл. Разбросы, разумеется огромные, плюс-минус около 30%. Предел обнаружения- 2 нг/мл (в среднем). Наверняка, есть работы и посвежее. Сам я витаминами в биологических жидкостях не занимался, в растениях и фармпрепаратах- было дело, лет 10 назад. Делал ионным обменом. Вообще, легче сказать, чем я не занимался. ВЭЖХ такая вещь, что работа всегда найдется. Меня больше интересовали в свое время гликопротеины (антигендетерминантные) вирусной оболочки. Очисткой противоэнцефалитной вакцины занимался. Начинал я в 1984 году с высокотемпературной гель-хроматографии полипропилена. Потом были наркота разного рода, клофелин и снотворное в алкоголе, и много всякого другого. |
|||||
|
Andrew VIP Member Ранг: 1370 |
14.01.2004 // 21:59:43
А ТГК-кислоту в моче не делали? |
|||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
15.01.2004 // 14:24:04
Не успели. Наркодиспансер имеет свои соображения по этому поводу. Пока не договорились. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 9 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
