Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Анализ углеводовов ВЭЖХ >>>

  Ответов в этой теме: 23
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


toxic1978
Пользователь
Ранг: 220


25.04.2016 // 10:19:03     
Редактировано 3 раз(а)

что лично у меня всегда вызывает подозрение, когда задавая вопрос как определить то или иное вещество указывают модель хроматографа.....
Действия примерно таковы - поиск методики и выбор из имеющихся методик той, которая более подходи к вашим условиям - наличие колонки, растворителей, оборудования и реагентов для пробоподготовки. Либо потенциальная возможность покупки. А будет у вас хроматограф аджилент или какой любой - к делу не относится. Важно наличие детектора, а кто производитель - в общем то по фигу. Колонка Amino не для той пробы что вами описана.

Ну а если не отвлекаться от темы - правильно вам посоветовали Rezex, правда есть и другие аналоги. Цена вопроса - порядка 2 тыр ойро. В зависимости от производителя колонки будут отличаться и затраты на систему элюента - в спецификации к каждой колонке они свои. В любом случае главное - правильная пробоподготовка, очистка от мешающих веществ пробы и без нее никак. Без правильной очистки пробы все остальные пляски с бубнами бесполезны. Кроме того, не очистите пробу - еще и колонке хана будет и боюсь, что сразу после первого раза. Подбор конкретной колонки Rezex смотрите на сайте производителя и по рекламным буклетам по временам выхода интересующих веществ. В любом случае мой совет - консультация с теми, кто анализирует объект подобный вашему по составу и предварительное обсуждение путей решения возникших проблем по ходу их работы. Просто вколол и забыл скорее всего в вашем случае не получится.
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Nehochyha
Пользователь
Ранг: 64


25.04.2016 // 14:17:44     

sirer пишет:

Nehochyha пишет:
Вопрос - можно ли использовать эту колонку для разделения данной смеси, но в качестве элюента употребить 100% разбавленный раствор серной кислоты?! Да или нет, почему? Если да - тогда какой механизм разделения будет и в каком порядке будут выходить компоненты?
Нет, нельзя. Вода с серной кислотой применяется для разделения углеводов на специальных колонках Rezex (см. например www.yumpu.com/en/document/view/6819134/rezex-phenomenex/5) в режиме ионэксклюзионной хроматографии.
Аминофаза этот режим не обеспечивает, разделять на ней сахара можно только в режиме распределительной хроматографии

Спасибо за ответ! И еще сопутствующий вопрос по теме - как можно судить (предсказывать, предполагать???) о режиме разделения, имея только колонку и известный объект для анализа? Естесственно это приходит с опытом и определенным багажом знаний. Но где об этом можно почитать, чтобы написано было максимально доступно и разъяснено все как для школьников.
Nehochyha
Пользователь
Ранг: 64


25.04.2016 // 14:22:25     

Волгин пишет:
А воспользоваться поиском по "Rezex hplc" слабо? В Яндексе первая ссылка: Rezex Ion-Exclusion HPLC Columns; phenomenex.com›rezex
Да и другие неплохи.


Уважаемый Волгин, неожиданно получать от ВАС такие резкие ответы. Тем более вопрос был в другом. Конечно же, весь интернет проштудирован. В описаниях к колонкам приведены только результаты! Без причинно-следственных связей и объяснений что к чему и почему. Поэтому и спрашиваю умных людей.
Nehochyha
Пользователь
Ранг: 64


25.04.2016 // 14:27:18     

Lipids пишет:

Волгин пишет:
А воспользоваться поиском по "Rezex hplc" слабо? В Яндексе первая ссылка: Rezex Ion-Exclusion HPLC Columns; phenomenex.com›rezex
Да и другие неплохи.

Ну не все же люди занимаются ВЭЖХ на постоянной основе, для кого-то это неосновной метод и т.п.

По теме, при работе с амино колонками надо избегать кислот вообще (исключая только специальные условия разделения и специальные методики).


Спасибо Липид за понимание и защиту! ))
И повторю недавно заданный вопрос - где можно почитать о режимах разделения на разных колонках, чтобы описано было максимально развернуто, вплоть до того что происходит на фазах при разделении? Заранее спасибо!
Nehochyha
Пользователь
Ранг: 64


25.04.2016 // 14:41:26     

cholesterol пишет:
Можно попробовать помимо HILIC (аминофаза+вода/ACN, как Вы сейчас используете) и ион-эксклюзионной хроматографии (колонки типа rezex+слабый раствор кислоты, как Вам рекомендуют) еще и ИОХ (сильный анионообменник+слабый раствор щелочи, в Google поищите Carbohydrate analysis with HPAE-PAD)

Благодарю сердечно за развернутый ответ! А разве колонки Rezex и CarboPac не идентичны? В обеих используются сополимеры стирола и дивинилбензола с разными катионами. Разъясните, пожалуйста, если неправильно.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Высокотемпературная лабораторная электропечь SNOL 30/1100 Высокотемпературная лабораторная электропечь SNOL 30/1100
Электропечь SNOL 30/1100 предназначена для сушки и термообработки различных материалов в воздушной среде при температуре от 50 °С до 1100 °С. Рабочая камера электропечи выполнена из высоко эффективной волокнистой термоизоляции в виде нагревательного блока с вакуумированным нагревательный элементом.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
toxic1978
Пользователь
Ранг: 220


25.04.2016 // 15:21:11     
привитая фаза у каждого производителя может иметь модификации, определяющие ее свойства
cholesterol
Пользователь
Ранг: 109


26.04.2016 // 0:09:19     
Углеводы имеют значения рКа около 12, т.е. при высоком рН они ионизируются, что позволяет их разделить с помощью анионообменной хроматографии (AEC). AEC разделения углеводов предпочтительно когда необходимо определять малую концентрацию сахаров (высокая чувствительность при амперометрическом детектировании (предел обнаружения <1 нмоль)). Еще одним преимуществом можно считать возможность влияния на селективность небольшими изменениями в pH подвижной фазы. В качестве сорбента используются макропористой дивинилбензол функционализированный алкильными четвертичными аминогруппами. Как разделять смотрите специализированную литературу.

Удержание в HILIC упрощенно можно представить, как распределение аналита в водном адсорбированном слое, который образован на поверхности сорбента. Колонки на основе диоксида кремния с привитой аминофазой в сочетании с таким элюентом, как вода-ацетонитрил, довольно давно и часто используются для разделения углеводов. Основным недостатком таких колонок является очень плохая стабильность, а преимуществом, по сравнению с другими колонками для HILIC (диол, силикагель, амидные и др.), является более узкие и «правильные» пики сахаров.

Теперь немного про ион-эксклюзионную хроматографию сахаров.
В качестве сорбента используется сильный катионобменник чаще всего на основе полистирола-дивинилбензола. Разделение основано на комбинации эксклюзии (преимущественно для олигосахаридов) и лигандного обмена (преимущественно для моносахаридов). На поверхности катионобменника прикрепляют ионы металлов (ионы кальция, железа, серебра и др.) Эти ионы металла обеспечивает частично положительный заряд, который взаимодействует с очень небольшим отрицательным зарядом углевода (''лиганд''). Механизм разделения достаточно сложен, и я не буду вдаваться в детали. Можно сказать, что чем сильнее координационно связывается углевод с ионом металла, тем сильнее возрастает удерживание. Селективность, т.е. способность к формированию комплексов зависит от природы противоиона и его размера, а также от структуры и стереохимии углевода. В качестве элюента чаще всего используют воду или разбавленные растворы серной кислоты (5 - 10 мМ) и, как правило, разделение проводят при повышенных температурах (40-85◦C).
toxic1978
Пользователь
Ранг: 220


26.04.2016 // 9:33:49     
и при 25 градусах неплохо делится, вопрос в том, что за пробоподготовку делают. А за химизм такого деления хоть и "сложно", но очень хотелось бы почитать....
Nehochyha
Пользователь
Ранг: 64


27.04.2016 // 14:50:23     
Редактировано 1 раз(а)

Сholesterol, огромнейшее спасибо за такой развернутый ответ!!!!!
Про аминофазу пишут: "сорбенты с привитыми аминогруппами проявляют свойства слабых анионообменников". Значит, на моей колоночке можно поделить моносахара со слабым раствором щелочи в качестве элюента и амперометрическим детектором? А рефрактометр или УФ детектор ничего не увидят при таком разделении?

Таким образом, имея в распоряжении рефрактодетектор и смесь моносахаридов, лучшим выходом для меня будет поменять колонку на какую-нибудь Rezex-овую? Правильный ход мыслей?
Lipids
Пользователь
Ранг: 457


27.04.2016 // 17:05:05     
Редактировано 1 раз(а)


Nehochyha пишет:
Таким образом, имея в распоряжении рефрактодетектор и смесь моносахаридов, лучшим выходом для меня будет поменять колонку на какую-нибудь Rezex-овую? Правильный ход мыслей?

Моносахара отлично делятся на амино-фазе - тому куча примеров. Я не скажу что все люди так делают - но то, что большинство, это точно. Два детектора основные - рефрактометрический и по свето-рассеянию, я предпочитаю второй, но иногда лучше первый (когда есть летучие компоненты какия-то). Тот факт, что кто-то где-то что-то продемонстрировал и опубликовал одну (!) статью с тремя цитированиями за десять лет совсем не означает что нужно всё бросать и пытаться повторить этот результат какого-нибудь китайского аспиранта.

www.phenomenex.com/Application/Detail/14320?returnURL=/Search

там много примеров sugars in Applications

  Ответов в этой теме: 23
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты