Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Изопропанол или ТГФ вместо ацетонитрильного градиента >>>

  Ответов в этой теме: 12
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Изопропанол или ТГФ вместо ацетонитрильного градиента
igorchem
Пользователь
Ранг: 333

21.10.2015 // 19:06:37     
Редактировано 1 раз(а)

Добрый день,

попробовал на днях разделить смесь пептидов anchem.ru/forum/read.asp?id=20280 используя градиент ацетонитрила с водой 0-40% с добавлением 0.1% уксусной кислоты (ТФУ пока не приехала) и результаты понравились, пики, вернее гора пиков получилась.

Есть большое желание в связи со спецификой сенсора, отказаться от ПФ, в которой есть CN группа, да и азот вообще. O, C, H, F, Cl - подойдут, а вот азота хотелось бы избежать.

Сейчас смотрю в сторону ТГФ и изопропанола, понятно тоже градиент. В описанию к тем колонкам, что у меня есть (С18, С8, CN, фениловая) везде рекомендуют градиент ацетонитрила, и, как я понимаю, с завода они были залиты именно ацетонитрильным раствором.

Скажите, пожалуйста
1. можно ли перейти на другую ПФ и какую (изопропанол, ТГФ или еще что-то),
2. в каком растворе консервировать колонки

Спасибо!
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


21.10.2015 // 22:04:36     
Никакой разницы, только взять надо в 3 раза меньше. И от изопропанола будет бешеное давление, а от ТГФ будет вонять
igorchem
Пользователь
Ранг: 333


21.10.2015 // 22:51:58     

КонстантинС пишет:
изопропанола будет бешеное давление
ой, вот же я тормоз и про давление сразу не подумал, спасибо большое, что надоумили.

Скажите, пожалуйста, а правильно ли я понимаю, что ацетон вместо ацетонитрила обычно не применяют из-за того, что он в УФ имеет линии? А если у меня детектор другого типа и мне эти линии "ультрофиолетовы", то я могу попольозовать ацетон вместо ацетонитрила? Если да, вдруг кого-то не затруднит сказать в каких разумно пропорциях?

Спасибо!
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


22.10.2015 // 11:52:14     
Да, из-за УФ поглощения его применяют нечасто. Да, без УФ разницы никакой. По идее, он как ТГФ, так что его надо взять тоже раза в 3 меньше.
virtu
VIP Member
Ранг: 2135


22.10.2015 // 12:19:43     

igorchem пишет:

Есть большое желание в связи со спецификой сенсора, отказаться от ПФ, в которой есть CN группа, да и азот вообще. O, C, H, F, Cl - подойдут, а вот азота хотелось бы избежать.

Ацетонитрил для ВЭЖХ - это, как кровь для человека Это очень плохо, что Ваш детектор не любит ацетонитрил. Метанол, в данной ситуации, является намного более подходящей заменой, чем ИПС и тем более ТГФ.
igorchem
Пользователь
Ранг: 333


22.10.2015 // 15:01:12     
Редактировано 1 раз(а)


virtu пишет:
Метанол, в данной ситуации, является намного более подходящей заменой, чем ИПС и тем более ТГФ.
Скажите, пожалуйста, а если сравнить метанол и ацетон, вроде у последнего вязкость почти в 2 раза меньше, что было бы предпочтительнее?


virtu пишет:
Это очень плохо, что Ваш детектор не любит ацетонитрил.

если делить вещества, содержащие азот, пептиды например, то ПФ очень желательно иметь без содержания азота, тогда детектирование по азоту получается очень быстрым и можно в реальном времени на хорошей скорости (около 10мл/мин) видеть пики и даже чуть-чуть больше, то есть спектры (я еще так не делал, но почти уверен, что так получится на основе экспериментов с моим сенсором).

Если в разделяемой смеси у меня азота нет, то детектор будет работать только на возбуждении Н и С, что конечно хуже для скорости (думаю раз так в 20, а то и в 50), но тогда я могу использовать ацетонитрил как все нормальные люди.

Просто хочу выжать из своей методики все, что можно
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Колбонагреватель UT-4120 Колбонагреватель UT-4120
Предназначены для применения в лабораториях различного профиля для нагрева и выпаривания жидких образцов в круглодонных колбах. Объем колбы 250 мл. Максимальная температура нагрева: +450°С. Мощность: 500 Вт.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
Волгин
VIP Member
Ранг: 1327


22.10.2015 // 16:34:17     
Редактировано 1 раз(а)

ТГФ очень ядовит, вонюч, склонен к образованию гидроперекисей, которые в свою очередь взрывоопасны при высушивании и очень реакционноспособны, зачастую по отношению к объекту исследования.
Изопропанол и его смеси с водой очень вязки, но если у Вас колонки с 10-микронным сорбентом или очень низкая по сравнению с обычным анализом объемная подача насоса, то прокатит. То же самое, но в меньшей степени относится к этанолу и в еще меньшей - к метанолу. Но спирты легко образуют сложные эфиры с кислотами, часто используемыми для перевода пептидов в заряженное или наоборот незаряженное, в зависимости от природы пептида, состояние. А сложные эфиры, особенно метилтрифторацетат - весьма летучи. Вам нужны пузыри в Вашем детекторе? Можно слегка защелачивать спиртовую подвижную фазу, но необходимо контролировать степень защелачивания: при рН > 9, а то и 8 многие основанные на силикагеле неподвижные фазы начинают растворяться.
Ацетон также весьма вонюч и нехорошо действует на печень. Кроме того он сам весьма реакционноспособен и как в кислых, так и в щелочных условиях способен ди- и полимеризоваться. Реакция правда достаточно медленная и сразу после приготовления (в течение нескольких часов) можно работать. Последнее впрочем нужно проверять, поскольку с сильными кислотами и щелочами в смеси с ацетоном я не работал.
igorchem
Пользователь
Ранг: 333


22.10.2015 // 17:20:07     

Волгин пишет:
...
а про полимеризацию ацетона-то я тоже забыл, забьется сразу колонка-то, не дело это.

А этилацетат, в качестве компонента градиетна с водным раствором спирта, пользуют? Вдруг кто знает и что-то за или против такого, скажите, пожалуйста!

Я понимаю, что можно просто водой без градиента делить, но будет плохо и пики сильно размажутся, чего не хочется. Но все в поисках разумной ПФ без азота для обращенки.
Волгин
VIP Member
Ранг: 1327


22.10.2015 // 18:50:08     
Редактировано 1 раз(а)


igorchem пишет:
...а про полимеризацию ацетона-то я тоже забыл, забьется сразу колонка-то, не дело это.
Ну, не настолько это страшно! Во всяком случае попробовать стоит.
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


22.10.2015 // 20:05:16     
Редактировано 1 раз(а)

Ацетонитрил применяется только из-за УФ детектирования, в остальном он легко заменяется чем угодно другим.
Я бы ориентировался на ТГФ, поскольку привычка использовать его в обращенной-фазе есть, да и надо его максимум 30%, можно его отдельно один раз развести водой и такой раствор и использовать.
В гидрофильной все будет получаться даже лучше, чем с ацетонитрилом, но... тут его доля будет около 60-70%, то есть в плане капилляров - только сталь.
Ну, в ионной без проблем...
В эксклюзии это вообще стандартный растворитель. В нормальной фазе - тоже (в смеси с гексаном).
Ацетон тоже забавно, только привычки не наработано. Ацетон обычно кладут когда работают с каротеноидами (они красные, там УФ не нужен). А формально - не должно быть никаких проблем.
igorchem
Пользователь
Ранг: 333


22.10.2015 // 21:35:45     
Редактировано 5 раз(а)


Волгин пишет:
Ну, не настолько это страшно! Во всяком случае попробовать стоит.
буду пробовать, игра стоит свеч, при потоке 10мл/мин я ожидаю чувствительность моего сенсора по азоту примерно 200нг пептида на пик, а при потоке 0.1мл/мин, примерно 5нг на пик. Отпишусь как попробую, очень надеюсь, что получится похвалиться

А по поводу ТГФ на PEEK капилляры, пожалуйста, посвятите!

У меня сейчас помпа, колонки, семплеры, инжекторы, и все соединения между ними - сталь, а вот сам сенсор - там все сложнее - мне надо было соединять его внутренний кварц с внешним миром и я использовал UPP-630, который соединяется в PEEK капилляр длиной около 30см и через еще один UPP-630 уже на металл. Теоретически я могу перейти на сталь везде, оставив UPP-630 в качестве переходника, но ужасно не хотелось бы. Тем более, что я уже забил на мысль гонять мой сенсор под давлением.

Скажите, пожалуйста, правда, что ТГФ PEEK-овский капилляр и Tefzel-овский юнион может разъесть?

EDIT: да, правда, сам нашел, вот же засада. Значит, буду ацетон пробовать. Жалко, ТГФ даже под рукой есть, хотя и ацетон - тоже, только не понятно насколько чистый.

EDIT++: вот засада, PEEK от ацетона тоже портится! А на сталь я быстро не перейду, там все очень не тривиально...

  Ответов в этой теме: 12
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты