Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Простая и понятная база соответствий колонок и подвижных фаз для белков и пептидов >>>

  Ответов в этой теме: 3

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Простая и понятная база соответствий колонок и подвижных фаз для белков и пептидов
igorchem
Пользователь
Ранг: 333

13.10.2015 // 17:47:58     
Добрый день,

опять я к Вам со своими тараканами. Посоветуйте, пожалуйста, САБЖ. Хочется, чтобы было понятно, что для таких-то колонок и таких-то аминокислот, или пептидов, или белков надо брать такую-то подвижную фазу... читаю бегло по-русски, английски, немецки, на крайняк дочка с французского переведет.

Вопрос вызван тем, что попробовал из общих соображений поделить самопально сделанную смесь полимеров аспаргиновой кислоты (спек ее, чтобы получить полимеры), в качестве колонки брал Nucleosil® C18 HPLC Column 5 μm particle size, L × I.D. 10 cm × 4.6 mm, эллюэнтом - этанол с водой 1:1, вначале вылезло два маленьких левых пика примесей (не смог понять что) и потом все вылезло одним горбом, в котором сенсором угадывалось, что вначале был мономер, потом пик димера, и тд. Скорость была 0.1мл/мин, из-за сенсора.

Цель всего, как я тут раньше писал, потестировать свой спектральный сенсор и понять на сколько он хорош.

То есть если кто-то смог бы мне посоветовать пару-тройку интересных экспериментов что поделить и не потратить на исходные вещества уйму денег, был бы премного благодарен!

Спасибо!
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
AA_Alex
Пользователь
Ранг: 371


14.10.2015 // 12:48:08     
Для аминокислот/пептидов самый стандартный вариант разделения - это плавный (длинный) градиент от 2-5% до 50% или даже больше ацетонитрила с 0,1% ТФУ (вода тоже делается с 0,1% ТФУ) на С18 колонке. Для белков то же самое, но сорбент должен быть специально "заточен" под крупные молекулы (размер пор 300Å и больше). Аминокислоты (если это не ароматические) без дериватизации вы УФ-детектором не увидите.

И как это вы интересно "спекли" из аспарагиновой кислоты пептиды? Синтез пептидов не самая тривиальная вещь.
Valeriy
Пользователь
Ранг: 431


14.10.2015 // 17:47:19     
Редактировано 3 раз(а)

Вполне возможно уважаемый igorchem использовал микроволновой синтезатор коротких пептидов, к примеру www.analyt.ru/index.php/equipment/mikrovolnovye-sistemy-dlya-sinteza-peptidov-i-proteomiki?yclid=5918038546543974819 . Поэтому и написал "спекли".
Колонки С18 в этом виде анализа (если предполагается анализ, а не очистка) будут служить не долго - по моему опыту полгода, год. Лучше использовать какую нибудь ионообменную смолу. Обойдется дороже, но срок службы побольше. Но пептиды пептидам рознь, да и у меня опыт не очень большой.
А начинать анализ нужно не с готового продукта, а с исходных аминокислот: времена удерживаний для каждой, нет ли наложений пиков, какие примеси (как без них) в исходных веществах. А потом пробовать делить готовый продукт. Масса тонкостей, интересная работа!
Да вот забыл. Этанол в химии - незаменимая весч, , но где вы прочитали что его используют для хроматографирования пептидов?
igorchem
Пользователь
Ранг: 333


15.10.2015 // 10:45:57     
Редактировано 4 раз(а)

2 AA_Alex
огромное спасибо за методику, про трифторуксусную - это очень классно, мне как раз она подошла бы для сенсора



Аминокислоты (если это не ароматические) без дериватизации вы УФ-детектором не увидите.

а я не говорил, что у меня УФ, спектры-то разные бывают но пока пожалуйста, давайте этот момент не обсуждать, примите, пожалуйста, за данность, что концентрированный раствор глутаминовой и аспарагиновой кислот моим сенсором можно очень хорошо друг от друга отличить, другое дело, что пока я не могу сказать что де это глутаминовая или аспарагиновая, но это, я надеюсь, поправимо

Спекал по методике, описанной в главе полиаспаргиновые кислоты по ссылке
www.wiley-vch.de/books/biopoly/con_v07.html

Про этанол - из общих соображений, да и в гугле такие методики встречаются, правда тоже с градиентом. У меня градиента не было, и, честно говоря, по возможности хотелось без него.

Как я как-то до этого писал, основная цель у меня - отладить сенсор и понять что он может детектировать, а не самоцель - делить пептиды и белки, посему я стандартами аминокислот пока еще не обзаводился и не сильно-то хотел, но, при сильной необходимости, конечно обзаведусь.

Понятно, отлаживая сенсор я могу в его кювету наливать чистый раствор того, что хочется детектировать, но мне это уже не сильно интересно, ибо видеть получается многое, а вот со скоростью и низкой концентрацией у моего сенсора пока проблемы, посему хочется иметь несколько простых и повторяемых экспериментов со смесями пептидов, которые достаточно хорошо разваливаются на разные пики, и смотреть как в реальности это все происходит.

Идеально было бы конечно малой кровью (то есть малым бюджетом и затратами по времени) подобрать хороший набор на 5-10-20 экспериментов смесей актуальных пептидов и/или белков и чтоб доставаемо было, и колонки тоже доставаемы, и элюенты, и чтобы можно было много раз потренироваться и таки отладить математику в моем сенсоре.

Спасибо всем огромное, что советуете!!!

  Ответов в этой теме: 3

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты