Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Проблема с определением антибиотиков в молоке методом ВЭЖХ >>>

  Ответов в этой теме: 10

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Проблема с определением антибиотиков в молоке методом ВЭЖХ
Zykov
Пользователь
Ранг: 34

03.10.2014 // 15:49:15     
Редактировано 1 раз(а)

Всем привет! Проблема в следующем:
Система Agilent infinity 1290. Определяем антибиотики сульфаметазин и сульфацетамид, снимаем данные в режиме MRM, т.е. чувствительность бешеная. Подвижная фаза вода-ацетонитрил 9:1 с последующим градиентом.
Проблема в том, что после нескольких заколов антибиотиков, они где-то глубоко засели. Колим дис. воду и получаем отличную хроматограмму остаточного содержания антибиотиков , время удерживания при этом сохраняется, но нет воспроизводимости по площади (то больше то меньше). То есть понятно, что засели они не в колонке. Все возможные аппаратные методы промывки (purge quat. pump, needle wash autosampler) применяли, но ничего не помогает. Хочется понять где антибиотики могут сидеть и как от них избавиться. При рутинных анализах на антибиотики не будешь же после каждого закола что-то разбирать и чистить.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Zykov
Пользователь
Ранг: 34


03.10.2014 // 16:48:56     
Немного удалось пообщаться с одним хроматографистом практиком. По его мнению для анализа антибиотиков необходимо использовать специальную не стальную иглу (какую-то стеклянную), ибо на стальную эти антибиотики и садятся. Первый раз такое слышал вообще. Капилляр от автосамплера до колонки насколько я понимаю тоже стальной, в чем смыл тогда стеклянной иглы - все будет садиться в капилляре. Короче говоря непонятки вообще.
Garry
VIP Member
Ранг: 1075


03.10.2014 // 17:03:10     
Редактировано 2 раз(а)


Zykov пишет:
Немного удалось пообщаться с одним хроматографистом практиком. По его мнению для анализа антибиотиков необходимо использовать специальную не стальную иглу (какую-то стеклянную), ибо на стальную эти антибиотики и садятся. Первый раз такое слышал вообще. Капилляр от автосамплера до колонки насколько я понимаю тоже стальной, в чем смыл тогда стеклянной иглы - все будет садиться в капилляре. Короче говоря непонятки вообще.
Уважаемый, фиговая сходимость площадей пиков - суть не шаманства с иглами автосамплеров, а суть работы самого автосамплера. Ну что с того, что Вы замените иглу автосамплера на стеклянную или на сапфировую... а далее у Вас металлических коммуникаций- хоть пруд-пруди. Например сам инжекционный блок с петлей, тело колонки и т.д.. Так что хроматографист-практик мягко говоря неправ. Ищите причины отсутствия сходимости в работе автосамплера (возможно утечки при инжекции, забитая игла отстатками септ виал...), возможно потерь при детектировании в случае ESI (но у Вас я так понимаю, другой принцип).
Zykov
Пользователь
Ранг: 34


04.10.2014 // 9:03:28     
Суть проблемы не в отсутствии воспроизводимости, а в том что при вколе дистиллированной воды у нас выходят пики антибиотиков. То есть они где-то в системе ввода пробы сидят и при вколе частично вымываются. Естественно воспроизводимости при этом не будет.
Zykov
Пользователь
Ранг: 34


04.10.2014 // 9:04:09     
Задача избавиться от антибиотиков в системе.
IvanStyskin
Пользователь
Ранг: 147


04.10.2014 // 13:29:51     
Ну мыть, промывать... Какой Вы совет еще хотите услышать. С трубочками этими мелкими аджилентовскими тем более это сложно, диаметр малый.
Промывайте пока при заколе подвижной фазы не будет ровной базовой линии. И методика видимо несильно хорошая. Дорабатывайте.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Колбонагреватель UT-4120 Колбонагреватель UT-4120
Предназначены для применения в лабораториях различного профиля для нагрева и выпаривания жидких образцов в круглодонных колбах. Объем колбы 250 мл. Максимальная температура нагрева: +450°С. Мощность: 500 Вт.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
virtu
VIP Member
Ранг: 2115


04.10.2014 // 15:45:24     
Редактировано 1 раз(а)

1. Оптимизировать состав промывочной жидкости АС (например, просто вода здесь не подойдет). Оптимизировать процедуру промывки АС перед/после инжекции.

2. Оптимизировать состав элюента.

3. Обратите внимание на режим работы АС - после инжекции поток не должен переключаться, т.е. элюент должен проходить через петлю и иглу.
Kalambet
Пользователь
Ранг: 476


04.10.2014 // 23:48:31     
А как вам такая идея: вообще-то далеко не все равно, в чем растворена проба. Холостой вкол должен содержать не дистиллят, а элюент начального состава. Если вкалывается дистиллят, он меняет условия сорбции антибиотиков и они смываются со стенок. Если хочется избавиться - мыть надо дистиллятом, но если в холостом с начальным буфером пиков нет, то и не надо мыть - и так хорошо. Только не растворять пробу в дистилляте.
TCDD
Пользователь
Ранг: 16


05.10.2014 // 2:22:35     
Редактировано 1 раз(а)

Если по Вашему мнению проблема в системе ввода, то я посоветовал бы проинспектировать состояние уплотнителя ротора клапана ввода (5068-0007 Injection valve rotor seal), это деталька из веспела/графита в которой собственно проточены каналы, по которым движется ПФ, находящаяся в клапане и протекающая либо в mainpass либо в bypass. Ресурс заявленный производителем на эту часть ротора - 2000 переключений туда-сюда. Потом каналы эти начинают раздалбываться и в принципе я не исключаю вероятности образования некоего "кармана", в котором может застаиваться то, что приходит сюда с иглы/петли (канал удлиняется и его край выходит за пределы выходного отверстия, ведущего от клапана к колонке).
Ради эксперимента можете попробовать временно переставить на место ротора клапана автодозатора ротор клапана из термостата колонок (как правило им пользуются гораздо реже и его кондиция гораздо лучше),(соответственно пустив поток на колонку и из колонки напрямую).
Конечно версия несколько надуманная, но кто знает, вдруг поможет. У нас в лабе были некоторые проблемы с этой деталью (воспроизводимость пиков ухудшалась), заказали пару новых.
Zykov
Пользователь
Ранг: 34


06.10.2014 // 10:05:10     
Фух, вроде отмылся! Погонял вручную подвижную фазу через bypass и mainpass, а также прогнал слабый раствор ПАВа (амфоацетата) через систему. Вроде все норм стало.
virtu
VIP Member
Ранг: 2115


06.10.2014 // 11:13:10     

Zykov пишет:
...а также прогнал слабый раствор ПАВа (амфоацетата) через систему.
Ждем новую тему по отмывке В SCAN лучше не ходите. Незнание - это блаженство Хотя может и повезло...

  Ответов в этой теме: 10

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты