Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ОФ ВЭЖХ: определение гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК) с дериватизацией >>>

  Ответов в этой теме: 3

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: ОФ ВЭЖХ: определение гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК) с дериватизацией
romanroman5999
Пользователь
Ранг: 3

04.08.2014 // 18:51:44     
Здравствуйте всем!
задача такова: Идентифицировать гамма-аминомасляную кислоту (ГАМК) в питательном бульоне, содержащем предшественник ГАМК глутаминовой кислоты, после культивирования условного штамма, способного её синтезировать. Для этого применяем метод обращённо-фазной ВЭЖХ. В данной методике описаны условия для проведения хроматографии.
Авторы данной методики предлагают для дериватизации ГАМК смешать 20 мкл OPA-MCE с 10 мкл пробы и 100 мкл боратного буфера и вколоть 20 мкл в колонку.

Кто-нибудь может объяснить зачем пробу, на стадии дериватизации смешивают с боратным буфером? Получается, что проба здорово разбавляется.
HPLC Analysis of GABA.
GABA was derived by mixing
10 мкл of the amino acid solution with 20 мкл OPA-MCE and
100 мкл boric acid buffer. The mixture was reacted at room
temperature for 5 min. An S1121 Solvent Delivery System
(Syknm) with UV/VIS Detector 3200 was used for separation
and detection of amino acids. A Hypersil ODS colum (250
x 4.6 mm, 5 m) was used for separation of amino acids.
All samples and the mobile phase were filtered with 0.45
m syringe filter discs and degassed by sonication. Sample
aliquots of 20 мкл were injected into the analytical column and
the mobile phase flow-rate was fixed at 0.8 ml min-1 and at
the wavelength of 338 nm.
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
абр
Пользователь
Ранг: 881


05.08.2014 // 8:42:35     
Для проведения реакции дериватизации при оптимальных значениях рН.
Garry
VIP Member
Ранг: 1076


05.08.2014 // 11:11:25     
Редактировано 1 раз(а)


romanroman5999 пишет:
Кто-нибудь может объяснить зачем пробу, на стадии дериватизации смешивают с боратным буфером? Получается, что проба здорово разбавляется.
Чувствительность метода определения через образование аминокислот с орто-фталевым альдегидом (вернее его производным) достаточно велика. А добавление боратного буфера - необходимо для поддержания оптимального рН реакционной среды.
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


06.08.2014 // 15:23:09     

romanroman5999 пишет:
после культивирования условного штамма,

Получается, что проба здорово разбавляется.

если "условный штамм" настолько фигово работает, что разбавление в 10+ раз все портит, то к черту такой штамм... В противном случае разбавление буфером только на пользу- меньше дряни попадает в колонку.

  Ответов в этой теме: 3

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты