Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

объем петли инжектора >>>

  Ответов в этой теме: 18
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: объем петли инжектора
petrovps
Пользователь
Ранг: 22

28.10.2013 // 7:18:21     
Доброе утро, коллеги!
Снова нужна квалифицированная помощь. Какой объем петли инжектора лучше всего подходит для ВЭЖХ-МС системы: насос Dionex ISO 3100, масс-спектрометр ThermoScientific MSQ Plus. В настоящее время стоит петля на 20 мкл. Работаем с колонкой Thermo Hypersil BDS C18 2.4 um 100x2.1, скорость потока до 0.3 мл/мин. Анализируем препараты в плазме крови.
Спасибо.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
AA_Alex
Пользователь
Ранг: 296


28.10.2013 // 7:49:25     

petrovps пишет:
Доброе утро, коллеги!
Снова нужна квалифицированная помощь. Какой объем петли инжектора лучше всего подходит для ВЭЖХ-МС системы: насос Dionex ISO 3100, масс-спектрометр ThermoScientific MSQ Plus. В настоящее время стоит петля на 20 мкл. Работаем с колонкой Thermo Hypersil BDS C18 2.4 um 100x2.1, скорость потока до 0.3 мл/мин. Анализируем препараты в плазме крови.
Спасибо.


А чем Вас не устраивает имеющаяся? У меня Реодайновский инжектор с 20-мкл петлей. Работаю и на 4.6 и на 2.1 колонках. Вы просто проверьте на каком-нибудь стандарте точность при вколах разного объема - 5, 10, 20 мкл. Если шприц хороший, не должно сильно ухудшать точность анализа. А если задачи научные, а не сугубо аналитические, то и вообще непринципиально.
petrovps
Пользователь
Ранг: 22


28.10.2013 // 9:30:25     
Есть подозрение, что мы перегружаем колонку, ведь в вытяжках из плазмы полно всяких примесей.
kvot
Пользователь
Ранг: 165


28.10.2013 // 19:36:34     

petrovps пишет:
Есть подозрение, что мы перегружаем колонку, ведь в вытяжках из плазмы полно всяких примесей.
Правильно вы все понимаете. Установите 5 мкл, это минимально возможная петля, которую можно поставить на инжектор Rheodyne.
AA_Alex
Пользователь
Ранг: 296


29.10.2013 // 5:59:45     
Редактировано 1 раз(а)


petrovps пишет:
Есть подозрение, что мы перегружаем колонку, ведь в вытяжках из плазмы полно всяких примесей.
Вы какую-нибудь пробоподготовку делаете? Что определяете, как делаете образец? Без пробоподготовки из любых "объектов окружающей среды" может много чего быть, что быстро убьет колонку. Предколонку используете?

petrovps
Пользователь
Ранг: 22


29.10.2013 // 8:15:14     
Редактировано 1 раз(а)

Предколонку используем, пробоподготовка заключается в осаждении белков с последующим центрифугированием, супернатант анализируем непосредственно. Что определяем не могу назвать.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
УВИ-спектрофотометр СФ-2000 УВИ-спектрофотометр СФ-2000
Спектрофотометр с диодной матрицей. Спектральный диапазон: 190-1100 нм.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
AA_Alex
Пользователь
Ранг: 296


29.10.2013 // 11:50:26     
Редактировано 1 раз(а)


petrovps пишет:
Предколонку используем, пробоподготовка заключается в осаждении белков с последующим центрифугированием, супернатант анализируем непосредственно. Что определяем не могу назвать.
Я бы просто попробовал вколоть 5, 10 и 20 мкл (если хороший шприц на 50 мкл - должно быть достаточно точно) и сравнил. Если вы осаждаете белки (кстати чем и как), то не должно быть перегруза колонки. Попробуйте еще проверить методом добавок. Вообще-то "в приличных домах" принято делать валидацию метода, хотя бы в сокращенном виде для себя, чтобы быть уверенным, что результаты соответствуют действительности (это если для научных целей), а уж если результат анализа выдаете на сторону ....
petrovps
Пользователь
Ранг: 22


29.10.2013 // 21:53:44     
Вколоть разные объемы наверное не получится, нет у нас петель с меньшим объемом. Белки осаждали ацетонитрилом, поначалу все шло хорошо, построили калибровку. Вскоре система стала вести себя неадекватно, на хроматограмме в одно и то же время сначала наблюдается провал базовой линии, а потом подъем. И самый интенсивный сигнал 222 m/z (метод ионизации ESI). Конус, линзу и фильтр ионов почистил как написано в мануале, но картинка не изменилась. Систему промывал, колонку тоже. Вот и подумал, что перегрузил колонку большими объемами пробы, а теперь примеси ползут постоянно
kvot
Пользователь
Ранг: 165


29.10.2013 // 22:26:43     
Редактировано 1 раз(а)


petrovps пишет:
Вколоть разные объемы наверное не получится, нет у нас петель с меньшим объемом. Белки осаждали ацетонитрилом, поначалу все шло хорошо, построили калибровку. Вскоре система стала вести себя неадекватно, на хроматограмме в одно и то же время сначала наблюдается провал базовой линии, а потом подъем. И самый интенсивный сигнал 222 m/z (метод ионизации ESI). Конус, линзу и фильтр ионов почистил как написано в мануале, но картинка не изменилась. Систему промывал, колонку тоже. Вот и подумал, что перегрузил колонку большими объемами пробы, а теперь примеси ползут постоянно
Вам более интересную идею предлагают, дозирование с частичным заполнением петли, дозируете необходимый объем шприцом (точно) в петлю, петля при этом у вас заполнена подвижной фазой. Для прикидки вполне может подойти, а петлю можно сделать самому из подходящего капилляра. А колонку вы перегружаете, если бы вас хотя бы проба была не в ацетонитриле, а растворителе по элюирущей силе такой же как подвижная фаза, или слабее. Объем колонки у вас очень маленький, полой всего - 350 мкл, поэтому 20 мкл для нее многовато, по хорошему бы 2 мкл вкалывать, но в вашем случае это невозможно.
cholesterol
Пользователь
Ранг: 109


29.10.2013 // 23:22:30     
Для Вашей колонки объем вкола должен быть не более 2 мкл, если вещество выходит с k=2 и не более 15 мкл с k=20.

При использовании ручного инжектора вводимый объем должен быть либо ≤ 50%, или ≥ 200% от объема петли для обеспечения максимальной точности.

При инъекции в растворителях, которые сильнее, чем подвижная фаза, образец проскакивает вниз по колонке пока растворитель полностью не смешается с подвижной фазой, т.е. часть колонки просто не используется для разделения и вместо 100 мм колонки вы получаете разделение как 80 мм колонке или того меньше.
petrovps
Пользователь
Ранг: 22


29.10.2013 // 23:25:47     

kvot пишет:
Вам более интересную идею предлагают, дозирование с частичным заполнением петли, дозируете необходимый объем шприцом (точно) в петлю, петля при этом у вас заполнена подвижной фазой. Для прикидки вполне может подойти, а петлю можно сделать самому из подходящего капилляра. А колонку вы перегружаете, если бы вас хотя бы проба была не в ацетонитриле, а растворителе по элюирущей силе такой же как подвижная фаза, или слабее. Объем колонки у вас очень маленький, полой всего - 350 мкл, поэтому 20 мкл для нее многовато, по хорошему бы 2 мкл вкалывать, но в вашем случае это невозможно.
Теперь понял, спасибо, завтра же попробую.

  Ответов в этой теме: 18
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты