Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Занижениер результатов ВЭЖХ в сравнении с микробиологическим методом определения бацитрацина. >>>

  Ответов в этой теме: 5

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Занижениер результатов ВЭЖХ в сравнении с микробиологическим методом определения бацитрацина.
Juan Esteban
Пользователь
Ранг: 13

16.07.2013 // 10:19:48     
Ситуация такая. Есть задача отработать методику ВЭЖХ для количественного определения бацитрацина в кормовом препарате цинк-бацитрацина. У нас на заводе его всегда определяли микробиологически (зона лизиса тест-культуры).

Используется прибор Waters Alliance c PDA-детектором.
Колонка: Waters Symmetry C18 150x3.9mm, 5mkm (старенькая, пока что есть)
Элюенты: ацетонитрил, метанол, 0,05M KH2PO4 (pH 6,0) + 1mM EDTA в воде.
Вода 40 % постоянно, ацетонитрил/метанол - градиент от 10/50 до 20/40.
Температура 25С, 254 нм

Пробоподготовку делаем аналогично м/б методу - разведение на 0,2М HCl, шейкер в течение 20 мин и центрифугирование 7 тыс. 15 мин.

В результате и у стандарта, и у образца происходит нормальное разделение пиков бацитрацинов А, В1+В2 и В3 (даже очень похоже на картинку из европейской фармакопеи). Калибровка линейная, по сумме пиков, единственное только поглощение слабое (около 0,02 ОЕ).

Так вот, по результатам такого анализа, выходит что в нашем препарате 46,6 мг/г вместо 116 мг/г, определнный микробиологически в 6 повторах. Тогда как в литературе говорится, что сходимость методик достигает 97 %. Все цифры/разведения я уже на 10 раз пересчитал, не могу понять, в чем может быть причина занижения?
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
virtu
VIP Member
Ранг: 2133


18.07.2013 // 15:25:48     
Приготовьте/найдите/купите QC samples с концентрациями LLOQ, HLOQ и где-то посередине.
Затем сделайте анализ этих трех образцов и бланка двумя Вашими методами (две методики) и все встанет на свои места.

А так, по-хорошему, методики надо валидировать, тогда и вопросов не будет.
Juan Esteban
Пользователь
Ранг: 13


18.07.2013 // 19:24:09     
Редактировано 1 раз(а)


virtu пишет:
Приготовьте/найдите/купите QC samples с концентрациями LLOQ, HLOQ и где-то посередине.
Затем сделайте анализ этих трех образцов и бланка двумя Вашими методами (две методики) и все встанет на свои места.

А так, по-хорошему, методики надо валидировать, тогда и вопросов не будет.

Вопрос решился - достаточно было уменьшить навеску образца, видимо, не весь бацитрацин растворялся.

Понимаете, я непрофессинальный хроматографист, занимаюсь этим "на полставки" (больше просто некому), поэтому валидировать методику мне будет хлопотно, я этим никогда не занимался.

Если можно поясните, про LLOQ, HLOQ - это что-то вроде минимума и максимума определяемого количества вещества? Где эти QC Samples берут?
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


18.07.2013 // 19:33:43     

Juan Esteban пишет:
Если можно поясните, про LLOQ, HLOQ -?
Вас в гугле забанили? (Очень долго объяснять ему придется.....)
Juan Esteban
Пользователь
Ранг: 13


19.07.2013 // 4:47:31     

Serga пишет:

Juan Esteban пишет:
Если можно поясните, про LLOQ, HLOQ -?
Вас в гугле забанили? (Очень долго объяснять ему придется.....)


Зачем этот снобизм? Просто спросил по случаю. Если человек разбирается в этом деле, парой абзацев можно вкратце описать что угодно.
virtu
VIP Member
Ранг: 2133


19.07.2013 // 14:57:46     
LLOQ - Lower Limit Of Quantification

HLOQ/ULOQ - Higher/Upper Limit Of Quantification

QC samples - покупают, берут у других или делают самостоятельно.

  Ответов в этой теме: 5

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты