| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Занижениер результатов ВЭЖХ в сравнении с микробиологическим методом определения бацитрацина. >>>
|
 |
| Автор | Тема: Занижениер результатов ВЭЖХ в сравнении с микробиологическим методом определения бацитрацина. |
|
Juan Esteban Пользователь Ранг: 13 |
 16.07.2013 // 10:19:48
Ситуация такая. Есть задача отработать методику ВЭЖХ для количественного определения бацитрацина в кормовом препарате цинк-бацитрацина. У нас на заводе его всегда определяли микробиологически (зона лизиса тест-культуры). Используется прибор Waters Alliance c PDA-детектором. Колонка: Waters Symmetry C18 150x3.9mm, 5mkm (старенькая, пока что есть) Элюенты: ацетонитрил, метанол, 0,05M KH2PO4 (pH 6,0) + 1mM EDTA в воде. Вода 40 % постоянно, ацетонитрил/метанол - градиент от 10/50 до 20/40. Температура 25С, 254 нм Пробоподготовку делаем аналогично м/б методу - разведение на 0,2М HCl, шейкер в течение 20 мин и центрифугирование 7 тыс. 15 мин. В результате и у стандарта, и у образца происходит нормальное разделение пиков бацитрацинов А, В1+В2 и В3 (даже очень похоже на картинку из европейской фармакопеи). Калибровка линейная, по сумме пиков, единственное только поглощение слабое (около 0,02 ОЕ). Так вот, по результатам такого анализа, выходит что в нашем препарате 46,6 мг/г вместо 116 мг/г, определнный микробиологически в 6 повторах. Тогда как в литературе говорится, что сходимость методик достигает 97 %. Все цифры/разведения я уже на 10 раз пересчитал, не могу понять, в чем может быть причина занижения? |
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
18.07.2013 // 15:25:48
Приготовьте/найдите/купите QC samples с концентрациями LLOQ, HLOQ и где-то посередине. Затем сделайте анализ этих трех образцов и бланка двумя Вашими методами (две методики) и все встанет на свои места. А так, по-хорошему, методики надо валидировать, тогда и вопросов не будет. |
|
Juan Esteban Пользователь Ранг: 13 |
18.07.2013 // 19:24:09
Редактировано 1 раз(а) Вопрос решился - достаточно было уменьшить навеску образца, видимо, не весь бацитрацин растворялся. Понимаете, я непрофессинальный хроматографист, занимаюсь этим "на полставки" (больше просто некому), поэтому валидировать методику мне будет хлопотно, я этим никогда не занимался. Если можно поясните, про LLOQ, HLOQ - это что-то вроде минимума и максимума определяемого количества вещества? Где эти QC Samples берут? |
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
18.07.2013 // 19:33:43
Вас в гугле забанили?  (Очень долго объяснять ему придется.....)
|
|
Juan Esteban Пользователь Ранг: 13 |
19.07.2013 // 4:47:31
Зачем этот снобизм? Просто спросил по случаю. Если человек разбирается в этом деле, парой абзацев можно вкратце описать что угодно. |
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
19.07.2013 // 14:57:46
LLOQ - Lower Limit Of Quantification HLOQ/ULOQ - Higher/Upper Limit Of Quantification QC samples - покупают, берут у других или делают самостоятельно. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 5 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
