Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

RP-HPLC амино кислот >>>

  Ответов в этой теме: 5

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: RP-HPLC амино кислот
NK
Пользователь
Ранг: 3

14.11.2005 // 4:54:15     
Редактировано 1 раз(а)

Господа аналитики!
Наверняка многие имеют опыт хроматографирования аминокислот в градиентном и/или изократическом режимах с использованием буферных систем или динамического модифицирования подвижной фазы (вода/ацетнонитрил/метанол).
Подскажите, пожалуйста, систему (элюент), в которой будут удовлетворительно разделяться аминокислоты (недериватизированные) на аналитической колонке с С18 в изократике.
Заранее благодарен.
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Леонид
VIP Member
Ранг: 5266


14.11.2005 // 9:54:21     
Сколько и каких аминокислот нужно разделить?
Если все 20 основных, то могу огорчить - в изократе, на обращенке, без дериватизации, с использованием обычных колонок это сделать - просто нереально, даже с динамической модификацией хроматографической системы.
NK
Пользователь
Ранг: 3


14.11.2005 // 10:29:08     
Нужно разделить смесь стандартов 6 аминокислот
(лейцин, гистидин, валин, серин, глицин и аланин)
Garry
VIP Member
Ранг: 1076


14.11.2005 // 10:40:51     
Редактировано 1 раз(а)

Насколько я знаю, из приведенных аминокислот практически ни одна, за исключением гистидина не имеет боле-менее серьезного поглощения в УФ свете (кроме неспецифического поглощения при 200-210 нм), поэтому обычно прибегают к дериватизации. В частности, получение фенилтиогидантоинов аминокислот. Эти ФТГ в изократике более-менее сносно делятся с помощью ПФ (разработана итальянцами, но координаты уже дать не могу - давненько это было). Состав : 0,05 М ацетат натрия (рН=5,0), 30 % ацетонитрила + 1 мл Дихлорэтана + 1 мл Этилацетата (все из расчета на 1 литр ПФ). Детектирование при 254 нм.

А без дериватизации можно попробовать в реверсном варианте с добавлением тетрабутиламмония бромида при рН близким к пределу выносливости обычной обращенки (7-8) при 210 - 220 нм. Но в этом случае пики аминокислот будут отрицательными.
NK
Пользователь
Ранг: 3


14.11.2005 // 16:25:00     
Редактировано 1 раз(а)

Большое спасибо всем откликнувшимся!
Может быть посоветуете ОФ систему для разделения вышеприведенных аминокислот в градиенте с использованием буфера.
Мне нужно разделить именно недериватизованные аминокислоты. Имеется аналитическая колонка с С18 и спектофотометрический детектор.
Есть подозрение, что эти аминокислоты будут элиюроваться не одним, а несколькими пиками (ионные формы и молекулярная форма), если готовить водные растворы.
Подскажите, в чем лучше растворить стандарты аминокислот чтобы избежать этого явления.
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


14.11.2005 // 18:48:44     

Есть два варианта обращенки, но лучше делать на силикагеле или аминофазе.

Если обращенка, то

1. Можно сделать с обычным додецилсульфатом с УФ 210нм, если их довольно много. 5мМ додецилсульфата-ацетонитрил гдето в отношении 70:30. Я так делал искусственные смеси аминокислот в таблетках - отлично делится.

2. "Крутой" вариат. Для разделения недериватизированных аминокислот в обращенке есть специальные ион-парный реагент - перфторинованная бутановая, кажется, кислота. Ацетонитрила, вроде бы, не надо вообще. рН надо контролировать (есть статьи в Журле Хроматографии А)

3. Самое лучшее - взять силикагель или аминофазу, и делить их в гидрофильном режиме. Элюент - примерно ацетонитрил-вода 80:20. Я так тоже одно время амикислоты и короткие пептиды делал.

Ну все. Кажется.

  Ответов в этой теме: 5

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты