Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

определение ингибиторов трипсина >>>

  Ответов в этой теме: 7

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: определение ингибиторов трипсина
kump
Пользователь
Ранг: 3124

16.04.2013 // 15:09:00     
Кто-нибудь может дать ссылки на методики, или хотя бы названия документов по определению ингибиторов трипсина?
Что-то не могу ничего найти
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Garry
VIP Member
Ранг: 1076


16.04.2013 // 17:10:27     

kump пишет:
Кто-нибудь может дать ссылки на методики, или хотя бы названия документов по определению ингибиторов трипсина?
Что-то не могу ничего найти

Работая когда-то в отделе молекулярной биологии я занимался выделением ингибитора трипсина из кукурузы, а потом определением его ингибирующей активности.Методики можно найти разве что в сборнике по биохимии издательства МГУ, год издания посмотрю только дома (на работе нет). В основу положена методика определения протеолитической активности трипсина. Т.е. необходим раствор субстрата (казеин по Гаммерстену на фосфатном буфере рН=8,0 или другой субстрат, содержащий пептидные связи, гидролизуемые трипсином), стандартный раствор трипсина в 0,001 М солянке, чтобы не происходил автолиз, термостат водяной на температуру 36 С, Эппендорф с насадками 10 мл, секундомер, 5 % раствор ТХУ, 0,05 М фосфатный буфер рН=8,0 и спектрофотометр (254 и 280 нм). Далее все тривиально, в ряд пробирок разливают субстрат, фосфатный буфер. Одну превращают в контроль реактивов и поэтому вместо ингибитора и раствора трипсина добавляют дист.воду, в другую вместо адекватного количества раствора ингибитора трипсина добавляют дист.воду, а раствор трипсина обязательно, но только после инкубирования пробирок с субстратом и разлитым ингибитором трипсина. Раствор трипсина добавляют по секундомеру с интервалом в 15 сек в прогретые пробирки, засекают 15 минут, затем в таком же порядке добавляют по 3 мл 5 % ТХУ для остановки реакции. Реакционные пробирки охлаждают, содержимое фильтруют и оптическую плотность фильтрата измеряют на спектрофотометре при 254 и 280 нм. (зависит от типа субстрата). Естественно, активность ингибирования определяют по кинетике процесса гидролиза. Если просто количество ингибитора, то нужно калибровку строить по стандартному раствору ингибитора трипсина из сои. Она имеет обратный характер
AA_Alex
Пользователь
Ранг: 371


17.04.2013 // 7:21:49     

kump пишет:
Кто-нибудь может дать ссылки на методики, или хотя бы названия документов по определению ингибиторов трипсина?
Что-то не могу ничего найти


Вы поконкретней спрашивайте. И лучше на molbiol.ru - там есть специалисты по ферментам.
Что значит "определение ингибиторов трипсина"? Выделение и очистка природных, типа соевого ингибитора трипсина? Или определение константы ингибирования? Трипсин - сериновая протеаза, соответственно ингибируется такими фторорганическими ингибиторами как PMSF, DFP, AEBSF (которые действуют на все сериновые протеазы) и более специфическими (апротинин, соевый ингибитор и ему подобные белки).
kump
Пользователь
Ранг: 3124


17.04.2013 // 8:39:52     
Дело в том, что с 1.06.2013г вступает регламент таможенного союза ТР ТС 021/2011. А там для соевых, диетических и продуктов детского питания заложены нормы. А по каким методикам определять? Стандартные есть? Или опять правая рука не знает, что делает левая?
Ясно, что с точки зрения ферментологии там не Бог весть что такое, но это ж импровизация.
r.bor
Пользователь
Ранг: 20


11.09.2013 // 15:17:04     
если данная тематика еще интересна, то есть такой ISO 14902:2001 - как раз для определение ингибиторов трипсина в соевых продуктах
kump
Пользователь
Ранг: 3124


11.09.2013 // 21:27:39     
Спасибо Вам большое. Хоть что-то.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Журнал Масс-спектрометрия Журнал Масс-спектрометрия
Оригинальные научные статьи, обзоры, учебные и некоторые справочные материалы по всем разделам теории и практики масс-спектрометрии.
r.bor
Пользователь
Ранг: 20


12.09.2013 // 11:08:32     

kump пишет:
Спасибо Вам большое. Хоть что-то.

если будут проблемы с поиском данного ИСО, то у меня есть скан этого документа. от Вас требуется адрес почтового ящика
kump
Пользователь
Ранг: 3124


12.09.2013 // 16:20:43     

r.bor пишет:

kump пишет:
Спасибо Вам большое. Хоть что-то.
если будут проблемы с поиском данного ИСО, то у меня есть скан этого документа. от Вас требуется адрес почтового ящика


Нашёл на англицком языке. Если у Вас на русском, пожалуйста kump{coбaчkа}list.ru

  Ответов в этой теме: 7

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты