Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

определение активности пероксидазы >>>

  Ответов в этой теме: 10

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: определение активности пероксидазы
елена 2012
Пользователь
Ранг: 18

06.01.2013 // 13:26:35     
Хочу определить активность гваякол-зависимой пероксидазы в растениях.
Для определения использую КФК-3.

Необходимо снять 5–10 точек. Таким же способом измеряют вторую опытную кювету.
Строят график зависимости оптической плотности D440 от времени t. На графике находят линейный участок и вычисляют скорость изменения оптической плотности D’440 = (D4402 – D4401) / (t2 – t1). (D’440 вычисляется по численным значениям, а не измеряется по графику!)
Как строить этот график?В Excel?Нужен строго линейный участок?
для примера я получала следующие цифры:
0,5 мин - 0,064
1 мин - 0,211
2 мин - 0,496
2,5 мин - 0,674
3 - 0,911
4 - 2,257
5 - 1,053
И на 5-й минуте все вставало колом и не менялось значение 1,053.Это нормально, что значение пошло вниз?
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Botrytis
Пользователь
Ранг: 181


06.01.2013 // 17:27:29     
А методику попроще искать не пробовали? Я, например, на КФК активность перокидазы по Бояркину с безидином определял, хорошая дуракоустойчивая. В этом же пособии спектрофотометрическое с гваяколом, не пробовал но думаю тоже хорошая. Пишите если надо.
елена 2012
Пользователь
Ранг: 18


06.01.2013 // 18:16:43     

Botrytis пишет:
А методику попроще искать не пробовали? Я, например, на КФК активность перокидазы по Бояркину с безидином определял, хорошая дуракоустойчивая. В этом же пособии спектрофотометрическое с гваяколом, не пробовал но думаю тоже хорошая. Пишите если надо.
Да, надо!Если не сложно отправьте методику на zorinaelena88{coбaчkа}mail.ru Буду рада любой информации.
kump
Пользователь
Ранг: 2844


07.01.2013 // 9:59:31     
Бензидин - канцероген. Говорят, сильный.
Botrytis
Пользователь
Ранг: 181


07.01.2013 // 14:00:54     
Я и не призываю им пользоваться, просто у меня его с килограмм лежит, а активность пероксидазы от случая к случаю определяю, технику безопасности соблюдаю. Сейчас вон бензойку к канцерогенам приписали, а в любом майонезе это добро лежит, а уважаемый? Но мы от темы уклонились, вот ссылка на файл, так удобнее может еще кому-то надо: files.mail.ru/O3C1MH
kump
Пользователь
Ранг: 2844


07.01.2013 // 18:50:29     

Botrytis пишет:
. Сейчас вон бензойку к канцерогенам приписали, а в любом майонезе это добро лежит, а уважаемый?

Бензойку? Да вы чо! Не слышал. А где написано?
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Дифференциальный сканирующий калориметр TA Instruments Nano DSC Дифференциальный сканирующий калориметр TA Instruments Nano DSC
Дифференциальный сканирующий калориметр Nano DSC специально разработан для определения термической стабильности и теплоемкости белков и других макромолекул в разбавленных растворах, с гибкостью и точностью позволяющей проводить скрининг молекулярной стабильности, связывание с лигандами и измерений инициированных давлением.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
Botrytis
Пользователь
Ранг: 181


07.01.2013 // 19:46:49     
В Гугле.
елена 2012
Пользователь
Ранг: 18


08.01.2013 // 16:36:05     

Botrytis пишет:
Я и не призываю им пользоваться, просто у меня его с килограмм лежит, а активность пероксидазы от случая к случаю определяю, технику безопасности соблюдаю. Сейчас вон бензойку к канцерогенам приписали, а в любом майонезе это добро лежит, а уважаемый? Но мы от темы уклонились, вот ссылка на файл, так удобнее может еще кому-то надо: files.mail.ru/O3C1MH
Спасибо ОГРОМНОЕ!!!! Еще вопрос относительно КФК (на нем приходится мерить т.к. ФЭК сломался). Вы измеряете изменение оптической плотности (она обозначена буквой Е на нем). А в методе по Бояркину она (под D) обозначена постоянной величиной 0,25. Как быть в этом случае с расчетом активности пероксидазы? Какая формула? И с уменьшением оптической плотности на 5-й минуте не понятно, так и должно быть? Я тоже работала с бензидином раньше, а теперь ФЭКа нет, и бензидина нет, зато есть гваякол, приходится извращаться и изобретать велосипед, т.к. на КФК раньше никогда не работала и в инструкции к нему по делу написано мало
Botrytis
Пользователь
Ранг: 181


08.01.2013 // 17:50:59     
Редактировано 1 раз(а)

Не надо ничего изобретать. Длина волны для гваякола - 470 нм. В одну кювету КФК толщиной 2 см наливаете все как в методике: 2 мл вытяжки, 2 мл буфера и 2 мл раствора гваякола + 2мл дистиллированной воды. Это контроль, на КФК оптическую плотность этой кюветы обнуляете. В Другую кювету: 2 мл вытяжки, 2 мл буфера и 2 мл раствора гваякола + 2мл Н2О2. С последней каплей (лучше пользоваться автоматической пипеткой) включаем секундомер и когда оптическая плотность опытной кюветы достигнет 0.250, выключаем секундомер. Оптимально если это происходит за 10-40 сек. Если быстрее то надо разбавлять вытяжку. Затем полученное подставляете в формулу и таким образом результаты отражают изменение оптической плотности за 1 сек на 1 г сырого веса ткани.
елена 2012
Пользователь
Ранг: 18


08.01.2013 // 19:34:38     
Спасибо.Очень вам признательна.Теперь вроде бы все встало на свои места. Решила сразу на начальном этапе разобраться, как говориться лучше день потерять, потом за час долететь!
Енька
Пользователь
Ранг: 1


08.04.2021 // 6:56:21     
Редактировано 1 раз(а)

Добрый день. Также возникла проблема с определением активности пероксидазы.
Правильно я понимаю, что при использовании бензидина расчет активности фермента идет по времени? Когда в опытную кювету добавляем перекись включаем секундомер и фиксируем время, когда оптическая плотность достигнет 0,250? И, соответственно, в формуле учитываем это время + вес ткани и степень разведения...
А если гваякол, то там нужно проводить измерения оптической плотности через каждые 20 сек до какого момента?
И главный вопрос, если в качестве субстрата используем бензидин, а методика снятия отчетов как по гваяколу это в корне неверно?

  Ответов в этой теме: 10

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты