Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ определение Карбоксиметилцеллюлозы >>>

  Ответов в этой теме: 12
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: ВЭЖХ определение Карбоксиметилцеллюлозы
Novice
Пользователь
Ранг: 71

05.07.2012 // 9:48:43     
Добрый день коллеги!
Сталкивался ли кто нибудь с определеним натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы методом ВЭЖХ? По найденому фрагменту методы, я растворяю ее (КМЦ) в воде, получая раствор примерно 1 мг/мл, используя колонку с диапазоном разделяемых масс - 100 000 - 1000000 и рефрактометр, элюирую в 0,1М р-ре хлорида натрия. Однако собственно, пик КМЦ не наблюдается. Может кто поделится зравыми идеями? Буду очень признателен.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Волгин
VIP Member
Ранг: 1275


05.07.2012 // 17:15:00     
Исходя из общих соображений:
1. Проверьте работу системы: воспроизведите тест-хроматограмму колонки.
2. Введите раз в 10, а то и в 100 большее количество аналита.
3. О результатах доложите.
Novice
Пользователь
Ранг: 71


06.07.2012 // 14:27:55     

Волгин пишет:
Исходя из общих соображений:
1. Проверьте работу системы: воспроизведите тест-хроматограмму колонки.
2. Введите раз в 10, а то и в 100 большее количество аналита.
3. О результатах доложите.

Спасибо что откликнулись.
Колонка рабочая.
Концентрацию увеличил практически в 100 раз. Примерно на 30 минуте обнаружил довольно большой пик, который по началу сопоставил с КМЦ. Потом разбавил концентрированный раствор в 2 раза, чтобы убедится, что полученный пик - действительно КМЦ. Однако получил примерно такой же по площади пик, примерно на 25 минуте. Т.е ни один из пиков не нявляется КМЦ. Кмц не выходит вобще. Ведь рефрактометр должен ее видеть. В качестве элюента использую воду. Что делать - не знаю...
virtu
VIP Member
Ранг: 2115


06.07.2012 // 17:42:56     
1. Условия? Диапазон масс указан для чего? Для белков?

2. Качество стандарта КМЦ? Растворять надо в элюенте, а не в воде.

3. Задача?
Novice
Пользователь
Ранг: 71


07.07.2012 // 8:47:23     

virtu пишет:
1. Условия? Диапазон масс указан для чего? Для белков?

2. Качество стандарта КМЦ? Растворять надо в элюенте, а не в воде.

3. Задача?


Диапазон масс указан в инструкции на колонку. Там про белки ничего не сказано.
Стандарт КМЦ - рабочий, т.е вопросов по нему нет.
Задача - определение КМЦ в препарате.
абр
Пользователь
Ранг: 854


07.07.2012 // 9:28:50     
Novice, вы уже полгода на форуме. Неужели за это время не поняли, как формулировать вопрос? В конце концов ответ нужен вам, а вместо этого приходиться по капле выдавливать все абсолютно необходимые для правильного ответа детали.
ЗЫ. Сорри за брюзжание, но...
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Учебный центр «МЕТРОН» Учебный центр «МЕТРОН»
Учебный центр ФГУП «УНИИМ». Повышение квалификации специалистов предприятий по вопросам метрологии, метрологического обеспечения, сертификации, аккредитации в различных сферах деятельности.
Novice
Пользователь
Ранг: 71


07.07.2012 // 9:47:46     

абр пишет:
Novice, вы уже полгода на форуме. Неужели за это время не поняли, как формулировать вопрос? В конце концов ответ нужен вам, а вместо этого приходиться по капле выдавливать все абсолютно необходимые для правильного ответа детали.
ЗЫ. Сорри за брюзжание, но...


Ничего, конструктивная критика облагораживает.
КМЦ в препарате это основное вещество. Методы анализа у меня нет, приходится действовать по обстановке. Т.к КМЦ водорастворим, то растворяю его в воде. Водой и произвожу элюирование. В УФ Кмц не поглащает, соответственно использую рефрактометр. Колонка фля гель-фильтрации одна - ultrahydrogel 1000 300*7.8. Скорость подвижной фазы - 1 мл/мин. Растворы стандарта КМЦ у меня различных концентраций (100 - 1 мг/мл). При этом пика КМЦ не наблюдаю вообще, хоть сколько времени не провожу анализ. Колонка при этом рабочая. (Первоначально колол метанольные растворы КМЦ и наблюдал пик метанола). Вот вроде вся информация.
абр
Пользователь
Ранг: 854


08.07.2012 // 10:09:47     
Редактировано 1 раз(а)

Скоро подтянутся с дачи гуру, а я пока позволю себе процитировать одного из них, Garry: "Привожу рекоммендации фирмы Тойо Сода для полимерных колонок для гельфильтрации при разделении :
1. Амфотерных гидрофильных соединений ( пептиды, белки, поли и олигосахариды, ДНК и РНК) - водный буферный раствор или солевой раствор 0,1 М NaNO3 или 0,3 М Na2SO4)"
Кстати, яндекс одной из первых ссылку на дает абстракт "Эксклюзионная жидкостная хроматография карбоксиметилцеллюлозы"
virtu
VIP Member
Ранг: 2115


09.07.2012 // 15:03:09     
Редактировано 1 раз(а)


Novice пишет:

Диапазон масс указан в инструкции на колонку. Там про белки ничего не сказано.
Стандарт КМЦ - рабочий, т.е вопросов по нему нет.
Задача - определение КМЦ в препарате.

1. В ЭХ строение сорбата имеет критическое значение, т.к. именно "размер" молекулы, а не молекулярная масса имеет значение, поэтому если указывается диапазон эксклюзии (Exclusion Range), то должны указываться соед. на которых этот "диапазон масс" получен: полисахариды (пуллулан и т.д.), белки, синтетические полимеры (ПЭГ и т.д.).

2. Это не задача. Качественный или количественный анализ? Какие требования? Может, Вы изначально, роете не в том направлении.

Если это фармпрепарат, то почему не работаете по фармакопее, в ЕФ 6, например, нет ни слова о эксклюзионной ВЭЖХ применительно к КМЦ.
virtu
VIP Member
Ранг: 2115


09.07.2012 // 15:14:22     
Редактировано 4 раз(а)

Итого:

1. Вполне вероятно, что Вы неправильно выбрали метод для решения своей задачи, которую так и не озвучили.

2. Вполне вероятно, что сорбент для этой задачи (не озвученной) не подходит (физические параметры), слишком узкий диапазон эксклюзии. Колонку рекомендуется протестировать в соотв. с паспортом или по-своему усмотрению (полисахариды).

3. В качестве элюента имеет смысл использовать, как уже писалось выше: 0.1M-0.2M NaNO3aq., 0.1-0.2M NaClaq.

4. Сэмпл растворять в элюенте.

5. Колонку правильно подготовить (см. мануал) к работе и оптимизировать об. скорость элюента (0,6-1 мл/мин), т.е. имеет смысл начать с 0,6 мл/мин.

6. Вводить в хроматограф не менее 100мкг КМЦ. Уточнить (для себя) параметры (ММР и т.д.) стандарта КМЦ.
Novice
Пользователь
Ранг: 71


09.07.2012 // 16:21:08     

virtu пишет:
Итого:

1. Вполне вероятно, что Вы неправильно выбрали метод для решения своей задачи, которую так и не озвучили.

2. Вполне вероятно, что сорбент для этой задачи (не озвученной) не подходит (физические параметры), слишком узкий диапазон эксклюзии. Колонку рекомендуется протестировать в соотв. с паспортом или по-своему усмотрению (полисахариды).

3. В качестве элюента имеет смысл использовать, как уже писалось выше: 0.1M-0.2M NaNO3aq., 0.1-0.2M NaClaq.

4. Сэмпл растворять в элюенте.

5. Колонку правильно подготовить (см. мануал) к работе и оптимизировать об. скорость элюента (0,6-1 мл/мин), т.е. имеет смысл начать с 0,6 мл/мин.

6. Вводить в хроматограф не менее 100мкг КМЦ. Уточнить (для себя) параметры (ММР и т.д.) стандарта КМЦ.


Задачу поставио руководство - количественное определение КМЦ в препарате причем именно ВЭЖХ методом.
В литературе встречается описание ВЭЖХ методик определения КМЦ, в частности товарищ абр посоветовал статью.
Наверное дело действительно в сорбенте, т.к первоначально я использовал именно 0,1М р-р хорида натрия, однако, искомый пик, кроме пика растворителя не выходил. Попробую поставить анализ, учитывая ваши рекомендации. Может что и получится. Спасибо

  Ответов в этой теме: 12
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты