| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Растворитель пробы для препаративной С18 ОФ ВЭЖХ >>>
|
 |
| Автор | Тема: Растворитель пробы для препаративной С18 ОФ ВЭЖХ |
|
klinerru Пользователь Ранг: 3 |
 20.03.2012 // 14:35:16
Помогите, пожалуйста, разобраться. Хотим воспроизвести синтез по описанию в патенте. В описании есть такой пассаж: "Crude product is dissolved in 80% TFA in DCM for 30 min to remove Boс group, followed by purification with C18 reversed-phase HPLC" (сырой продукт растворяли в 80% ТФУ в дихлорметане в течение 30 мин для удаления Вос-группы (защищала реакционную группу) с последующей очисткой с помощью С18 ОФ ВЭЖХ". У нас возникли вопросы: 1) ввод пробы в растворителе с такой высокой концентрацией ТФУ как скажется на здоровье колонки? Смущает в принципе состав растворителя пробы для ОФ ВЭЖХ. 2) Вопрос к работавшим с препаративными разделениями. В нашем распоряжении есть НРLC насос (до 2 мл/мин) и автосамплер с объемом пробы до 125 мкл. Необходимо почистить препарат для ЯМР-анализа, то есть выделить около 10 мг чистого вещества. Реально ли осуществить это на колонке скажем 4.6 мм х 150 мм. НЕ будет ли перегруза? (посматриваем на колонку 7.8х150 мм, но смущает, что поток для нее будет слабым). Спасибо. |
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|
Волгин VIP Member Ранг: 1326 |
20.03.2012 // 15:49:35
Редактировано 2 раз(а) Для колонки это конечно не полезно. Отгоните реакционную смесь и перерастворите в элюенте (на худой конец - в ацетонитриле). Перегруз, естественно, будет. Но все зависит от степени отделения целевого компонента от примесей. Описан случай, когда на аналитическую колонку грузили чуть ли не грамм вещества. Но там специальная техника (sample displacement chromatography). Начните с аналитики и грузите постепенно больше и больше. Может раз за 10 и поделите. Конечно автосамплер явно мал, найдите ручной инжектор с большой петлей. Если не будет получаться, перейдите на 7.8х150. Конечно разделение будет не ахти, но Вы все равно в перегрузе работать будете, там не до числа теоретических тарелок. PS C растворением в ацетонитриле я пожалуй поторопился с советом. Объем пробы большой и он будет работать как элюент: потащит пробу за собой. |
|
klinerru Пользователь Ранг: 3 |
20.03.2012 // 15:58:41
Спасибо вам за ответ. Про отгонку - учтем, растворимость компонента проверим, постараемся перерастворить растворителе, максимально близком к элюенту. С колонками - еще раз спасибо! Аналитический ввод обязательно сделаем - для прикидки. Про "раз 10" уже поняли, готовы на все )) ради дела. В автосамплере предусмотрено ручное управление инжекцией и запуском анализа. Попробуем сделать ввести 2-3 раза по 125 мкл и запустить анализ. Как по вашему, такой вариант возможен? (будет ли при этом страшное размытие или еще какой подводный камень вылезет?) |
|
Волгин VIP Member Ранг: 1326 |
20.03.2012 // 16:08:41
Редактировано 1 раз(а) Если будете работать в градиенте, то не очень близко от его начала возможно и прокатит. Если начнете с начальной концентрации сильного компонента элюента ОЧЕНЬ далекой от концентрации выхода Вашего вещества, прокатит точно. В случае пептидов я таким приемом часто пользовался. |
|
klinerru Пользователь Ранг: 3 |
20.03.2012 // 16:47:43
Отлично! Спасибо за консультацию |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 4 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
