Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ определение метаболитов реcвератрола в моче >>>

  Ответов в этой теме: 15
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: ВЭЖХ определение метаболитов реcвератрола в моче
snowfall
Пользователь
Ранг: 19

21.11.2011 // 1:27:41     
Редактировано 2 раз(а)

Здравствуйте, посоветуйте, пожалуйста, что делать в моем случае:
Задача:
Разделить метаболиты реcвератрола в моче (resveratrol sulfates and glucoronides) сначала на ВЭЖХ. Уровень содержаний для начала до 1.6 ng/ml, я неуверена, что можно работать и с меньшими, но, конечно, желательно.
Цели:
1. Последующий анализ на LC-MS.
2. Large-scale разделение. Планирую юзать CombiFlash® Rf тоже с С18, только бOльшего размера. Градиент там задается автоматически, поэтому хочу соптимизировать для начала на вэжх.
ВЭЖХ – Agilent 1100, сейчас стоит Water Atlantis 4,6mmX150mm, 3um C18 колонка. Градиент –ацетонитрил/вода.
У меня совсем нет опыта и я плаваю в огромном потоке инфы. Нужно ли использовать другую reverse phase? Как добиться лучшего разделения?
Буду благодарна любым комментам по теме.
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Дмитрий (anchem.ru)
Администратор
Модератор форума
Ранг: 4444


21.11.2011 // 3:09:30     
Редактировано 1 раз(а)

Начните с самого простого и правильного - с формирования задачи.
Что определять (метаболитов десятки тысяч) - конкретные соединения? В чем определять? На каком уровне содержаний?

Каким оборудованием и материалами располагаете?
(одних только колонок C18 наберется под сотню разных)

Чем больше конкретики - тем больше вероятность правильного ответа, а не перебора вариантов и вытягивания дополнительной информации...

И тп. и тд.

Попробуйте перечитать свой текст с позиции человека, который не работает за соседним столом.

После появления подробностей изменю название темы на более конкретное, это дополнительно привлечет внимание коллег.
Hramtzov
Пользователь
Ранг: 62


21.11.2011 // 23:09:56     
А вот сходу поисковик выдал : www.clinchem.org/cgi/content/full/53/2/292 Есть там что полезное?
Дмитрий (anchem.ru)
Администратор
Модератор форума
Ранг: 4444


21.11.2011 // 23:55:14     
название темы изменил.

А что именно не получается воспроизвести? Литературные разделения получились на стандартах?

Кстати, 1 нг/мл - это во вводимом растворе? Хотя даже с концентрировнием в 10 раз маловато для ВЭЖХ (УФ?),при вводе 5 мкл получится всего 5*10-11 г на вкол
virtu
VIP Member
Ранг: 2135


22.11.2011 // 1:10:08     
Редактировано 3 раз(а)

Непонятно.

1. Если у Вас стоит задача количественного анализа пока неизвестных метаболитов р-ла в моче, то:

А. LC-MS/MS или LC-DAD/UV-MS/MS
Б. Препаратив
В. ЯМР, ИК и т.д.
Г. Покупка/синтез стандартов и разработка методики количественного анализа...

2. Если у Вас стоит задача количественного анализа известных метаболитов р-ла в моче, тогда мне непонятны Ваши действия, т.к. нужно делать LC-MS/MS и все, хотя можно зайти и с LC-UV.

Инфы действительно много. Видимо, ТС не сделал нормальный лит. обзор (судя по используемым хром. условиям).

В общем, непонятно.

З.Ы.: Может подтянутся местные экстрасенсы и расшифруют...
Андрейвладими
Пользователь
Ранг: 139


22.11.2011 // 13:36:57     
Может быть стоит сконцентрировать метаболиты (а, заодно, и много другой органики) экстракцией CH2Cl2, CHCl3, EtOAc или эфиром из рН ~5 - 7?
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Cheminst Cheminst
Поставки приборов и расходных материалов для отечественной медицины, науки и промышленности. Является официальным представителем многих зарубежных компаний, в том числе OLYMPUS Optical, Hamilton, Alltech и др.
Islander
VIP Member
Ранг: 1065


22.11.2011 // 14:09:42     

snowfall пишет:

Задача:
Разделить метаболиты реcвератрола в моче (resveratrol sulfates and glucoronides) сначала на ВЭЖХ. Уровень содержаний для начала до 1.6 ng/ml, я неуверена, что можно работать и с меньшими, но, конечно, желательно.
Цели:
1. Последующий анализ на LC-MS.
2. Large-scale разделение. Планирую юзать CombiFlash® Rf тоже с С18, только бOльшего размера. Градиент там задается автоматически, поэтому хочу соптимизировать для начала на вэжх.

То, что Вы написали, вовсе не цели. Какая цель всего этого?
Наука явно исключается, метаболизм ресвератрола давно обсосан и новых метаболитов открыть вашими средствами не удастся.
Криминалистика? Зачем тогда препаративная часть, достаточно проанализировать на LC/MS...
В исследованиях ADME в фармацевтике тоже препаративного выделения обычно не проводят...
В общем, изложите, пожалуйста, для начала цель всех этих манипуляций!
snowfall
Пользователь
Ранг: 19


22.11.2011 // 21:34:49     

Дмитрий (anchem.ru) пишет:

А что именно не получается воспроизвести? Литературные разделения получились на стандартах?

Кстати, 1 нг/мл - это во вводимом растворе? Хотя даже с концентрировнием в 10 раз маловато для ВЭЖХ (УФ?),при вводе 5 мкл получится всего 5*10-11 г на вкол

Воспроизвела качественно литературные разделения, все работает. Хотелось бы найти другие метаболиты.
Числа взяла из статьи, где применяли обычную вэжх
snowfall
Пользователь
Ранг: 19


22.11.2011 // 21:35:44     
Редактировано 1 раз(а)


Hramtzov пишет:
А вот сходу поисковик выдал : www.clinchem.org/cgi/content/full/53/2/292 Есть там что полезное?
Литобзор я сделала.. но вопросы у меня всё равно остались..
snowfall
Пользователь
Ранг: 19


22.11.2011 // 21:41:50     

virtu пишет:
Непонятно.

Инфы действительно много. Видимо, ТС не сделал нормальный лит. обзор (судя по используемым хром. условиям).

Почему Вы так считаете? Сначала использовала систему метанол/изопропанол, но перешла на ацетонитрил/воду, так как собираюсь юзать эту систему на LC-MS.

virtu пишет:
Непонятно.

1. Если у Вас стоит задача количественного анализа пока неизвестных метаболитов р-ла в моче, то:

А. LC-MS/MS или LC-DAD/UV-MS/MS
Б. Препаратив
В. ЯМР, ИК и т.д.
Г. Покупка/синтез стандартов и разработка методики количественного анализа...

2. Если у Вас стоит задача количественного анализа известных метаболитов р-ла в моче, тогда мне непонятны Ваши действия, т.к. нужно делать LC-MS/MS и все, хотя можно зайти и с LC-UV.


Стоит задача качественного анализа и препаративного разделения.
snowfall
Пользователь
Ранг: 19


22.11.2011 // 21:43:17     

Андрейвладими пишет:
Может быть стоит сконцентрировать метаболиты (а, заодно, и много другой органики) экстракцией CH2Cl2, CHCl3, EtOAc или эфиром из рН ~5 - 7?
Метаболиты отделяю сначала от белков и мочевой кислоты, концентрирую в метаноле

  Ответов в этой теме: 15
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты