Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Странная форма пика на ГХ-МС. >>>

  Ответов в этой теме: 10

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Странная форма пика на ГХ-МС.
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1257

20.06.2011 // 16:18:05     
Редактировано 1 раз(а)

Добрый день!
Столкнулся вот с какой проблемой - пик олеиновой кислоты выходит с "бугорком".. но это однозначно не цис-вакценовая, так как ее пик следует далее и разделение очень хорошее:
- общий вид хроматограммы: img103.imagevenue.com/img.php?image=857227425_1308572274_122_948lo.jpg
- увеличенная область с пиками олеиновой - х (RT 22.300) - цис-вакценовой кислотами:
img238.imagevenue.com/img.php?image=572330650_1308572330_122_394lo.jpg

Данная картинка наблюдается в двукратной биологической повторности и 6 кратной аналитической, причем, схожая ситуация, правда при отсутствии пика вакценовой кислоты, отмечена и для другого вида исследуемого объекта.
Что это может быть? NIST утверждает, что это - 6-18:1, но такого быть не может - она бы вышла раньше олеиновой...
Можно ли как-то попробовать добиться лучшего разделения?

Исходные файлы: files.mail.ru/J63GWH

Условия анализа:
DB-23, 60 м, He 1 мл\мин, делитель потока – 1:20; начальная температура колонки – 130°С. Программа градиента температуры колонки: от 130°С до 170°С со скоростью 6.5°С/мин, от 170°С до 215°С со скоростью 2.75°С/мин, выдержка при 215°С в течение 25 мин, от 215°С до 240°С со скоростью 40°С/мин и выдержка при 240°С в течение 50 мин. Температура испарителя – 260°С. Рабочая температура МС-детектора – 240°С.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
virtu
VIP Member
Ранг: 2117


20.06.2011 // 17:40:22     
Редактировано 1 раз(а)

1. Если сделать добавку олеиновой кислоты в сэмпл (соотв. без олеиновой кислоты) и.., то ситуация та же?

2. Ну, NIST сам по себе ничего не "говорит", плюс многое зависит от качества самого масс-спектра, параметров поиска и т.д. В данной ситуации получить качественный масс-спектр очень сложно, ввиду сильной интерференции пиков и схожести масс-спектров аналитов, другими словами поиск по библиотеке приведет, с большой вероятностью, к "левым" результатам.

3. Думается, если это не АРТЕФАКТ, то это изомер олеиновой кислоты (двойная связь в другом месте). Можно ли улучшить разрешение? Да. Нужно менять темп. программу термостата колонки, как минимум, плюс, возможно, лин. скорость газа-носителя (в некоторых случаях "катит" градиент об. скорости элюента), и, конечно, уменьшить массу аналитов вводимых в колонку (раза в 2-5).

4. Хочется заметить, что многие "заметные" пики имеют не оптимальную форму, ввиду "перегруза колонки".
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1257


20.06.2011 // 18:02:04     
Редактировано 1 раз(а)


virtu пишет:
1. Если сделать добавку олеиновой кислоты в сэмпл (соотв. без олеиновой кислоты) и.., то ситуация та же?

2. Ну, NIST сам по себе ничего не "говорит", плюс многое зависит от качества самого масс-спектра, параметров поиска и т.д. В данной ситуации получить качественный масс-спектр очень сложно, ввиду сильной интерференции пиков и схожести масс-спектров аналитов, другими словами поиск по библиотеке приведет, с большой вероятностью, к "левым" результатам.

3. Думается, если это не АРТЕФАКТ, то это изомер олеиновой кислоты (двойная связь в другом месте). Можно ли улучшить разрешение? Да. Нужно менять темп. программу термостата колонки, как минимум, плюс, возможно, лин. скорость газа-носителя (в некоторых случаях "катит" градиент об. скорости элюента), и, конечно, уменьшить массу аналитов вводимых в колонку (раза в 2-5).

4. Хочется заметить, что многие "заметные" пики имеют не оптимальную форму, ввиду "перегруза колонки".

Добавку олеиновой кислоты в сэмпл мы не делаем, в предыдущих пробах и для других видов пик олеиновой без подобного "плеча". В качестве внутреннего стандарта используем маргариновую. Но в данной пробе ее нет, т.е. это просто FAMEs из растительных ТАГ для качественного жирнокислотного состава.
Есть подозрение, что это - транс-изомер - они часто возникают при дериватизации и даже на этапах очистки и выделения липидных фракций.. но как его так отделить, чтобы узнать достоверно - пока не знаю (
Видимый "перегруз" колонки - мера вынужденная, компромиссная, чтобы можно было еще и минорные компоненты оценить типа 12:0 или 15:0, докозановой и т.д... Можно, конечно, вколоть без делителя, но как быть тогда с огромными количествами пальмитата или линолеата? ( вот и сошлись на определенной негауссовости пиков.. С природными смесями в этом смысле непросто (
virtu
VIP Member
Ранг: 2117


20.06.2011 // 19:03:09     
Редактировано 1 раз(а)

1. Если не делали сэмпл с добавкой олеиновой кислоты, то можно сделать, но надо аналогичную матрицу подобрать без олеиновой кислоты. Этот пункт так же поможет доказать цис>транс.

2. Может и транс-изомер, но то, что изомер - это высоко вероятно. Может в этих сэмплах содержится что-то, что промотирует изомеризацию и т.д.

3. Можно тупо проверить версию цис>транс: взять "голую" (в гексане и т.д.) олеиновую кислоту и т.д. "жестко" - посмотреть будет ли "левый" пик появлятся. Думается, это более простое и надежное доказательство, чем возня с ГХ-МС.

4. Последнее - делить, но даже, если удасться добиться нормального разрешения, надо будет ломать голову над масс-спектром. В общем, понадобиться еще RI и т.д., возможно даже доказательство через предикт RI (путем интерполяции и т.д.), но это все без 100г. или аспирина - тяжко.
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1257


20.06.2011 // 19:10:34     

virtu пишет:
1. Если не делали сэмпл с добавкой олеиновой кислоты, то можно сделать, но надо аналогичную матрицу подобрать без олеиновой кислоты. Этот пункт так же поможет доказать цис>транс.

Вот это-то и самое тяжкое... Как из природной смеси, где олеиновая и цис-вакценовая кислоты присутствуют почти всегда, их отбросить? ((

Я пока склоняюсь к варианту "проигнорировать" данную метастазу - источник с пробой известен в случае чего, всегда можно провести дополнительное исследование в какой-нибудь из долгих зимних вечеров..
М! А если сделать DMOX? Может, они лучше разделятся, чем FAMEs? Да и масс-спектры там проще идентифицировать... не?..
virtu
VIP Member
Ранг: 2117


20.06.2011 // 21:32:42     

Chamomillablue пишет:


Я пока склоняюсь к варианту "проигнорировать" данную метастазу - источник с пробой известен в случае чего, всегда можно провести дополнительное исследование в какой-нибудь из долгих зимних вечеров..
М! А если сделать DMOX? Может, они лучше разделятся, чем FAMEs? Да и масс-спектры там проще идентифицировать... не?..


1. Если не горит, тогда забейте.

2. DMOX: Нужно пробовать, теоретически сложно сказать. Насчет различия масс-спектров цис- и транс-, в общем, ситуация не сильно улучшится.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Деионизатор воды ДВ-1 Деионизатор воды ДВ-1
Предназначен для получения в лабораторных условиях особо чистой деионизированной воды, используемой для приготовления растворов, хроматографических проб, заправки генераторов водорода/кислорода и других целей.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1257


20.06.2011 // 22:39:39     
virtu, а в каком направлении стоит менять давление-температуру?.. пока жду AMP для синтеза DMOX попробую таким образом разделить - авось выгорит что... на нобель, конечно, не шибко похоже, вероятнее шнобель, но надо проверить...
virtu
VIP Member
Ранг: 2117


21.06.2011 // 2:54:20     
Редактировано 1 раз(а)


Chamomillablue пишет:
virtu, а в каком направлении стоит менять давление-температуру?.. пока жду AMP для синтеза DMOX попробую таким образом разделить - авось выгорит что... на нобель, конечно, не шибко похоже, вероятнее шнобель, но надо проверить...
1. Включите фантазию Начните с темп. (нач. темп., количество и качество изотерм, скорость нагрева и т.д.), затем, если не получится, переходите/подключайте к градиенту давления элюента (1>2-4, 2-4>1 ml/min и т.д.). Да, и старайтесь начинать с самого простого. Простота - залог успеха.
Тонкая работа: тут либо творчески, либо математически. Последнее - надежно, но, может быть, скучно. Сильно не увлекайтесь - упирайтесь разумно.

2. DMOX: Все-таки, думаю положительный эффект на Rs должен быть, вопрос насколько - статьи посмотрите, может это уже история.
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1257


22.06.2011 // 21:27:55     
virtu, спасибо, всё получилось - в изотерме при повышенном давлении разделилось настолько сносно, что даже можно интегрировать )
жить, конечно, от этого легче не стало, ибо теперь надо понять что ж эта за дрянь там и куда девается в процессе созревания плодов.. Но, без пиколиниловыэ эфиров или DMOX это уже не решить... А то NIST по всем трем пикам теперь пишет 9-18:1 )))
Ясно одно - не артефакт и, судя по площади, претендует на роль главной кислоты...
virtu
VIP Member
Ранг: 2117


22.06.2011 // 22:02:49     

Chamomillablue пишет:
virtu, спасибо, всё получилось - в изотерме при повышенном давлении разделилось настолько сносно, что даже можно интегрировать )
жить, конечно, от этого легче не стало, ибо теперь надо понять что ж эта за дрянь там и куда девается в процессе созревания плодов.. Но, без пиколиниловыэ эфиров или DMOX это уже не решить... А то NIST по всем трем пикам теперь пишет 9-18:1 )))
Ясно одно - не артефакт и, судя по площади, претендует на роль главной кислоты...

Замечательно.
Выше уже говорил о проблемах с идентификацией по масс-спектрам в этой ситуации. Боюсь, может даже DMOX и т.д. не поможет и надо будет через ИУ (RI) идти. Масс-спектры совсем идентичные получились?

Кстати, я бы все-таки попробовал проверить версию изомеризации олеиновой кислоты цис>транс.
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1257


22.06.2011 // 22:14:20     

virtu пишет:
Замечательно.
Выше уже говорил о проблемах с идентификацией по масс-спектрам в этой ситуации. Боюсь, может даже DMOX и т.д. не поможет и надо будет через ИУ (RI) идти. Масс-спектры совсем идентичные получились?

Кстати, я бы все-таки попробовал проверить версию изомеризации олеиновой кислоты цис>транс.

Масс-спектры детально еще не смотрел, но FAMES не очень удобно диагностировать по MS.
Есть вариант поделить FAMES препаративно с Ag, и затем сделать DMOX или пиколиниловые - тогда легче будет идентифицировать.
Версия транс- положений не исключена, но маловероятна.. в растениях транс-кислоты практически невозможны, а если бы это была ошибка методики, то у нас бы вылезли транс-изомеры и для других ненасыщенных кислот - а этого не наблюдается...
В общем, "вскрытие покажет" ))
Планируем закупить DB-88 - она должна хорошо делить цис- и транс-, если верить Agilent...

  Ответов в этой теме: 10

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты