Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Минерализация липидов. нужна помощь!!! >>>

  Ответов в этой теме: 14
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Минерализация липидов. нужна помощь!!!
innakem
Пользователь
Ранг: 5

15.06.2011 // 11:46:43     
Здравствуйте всем!
мне нужна помощь - не могу добиться удовлетворительной минерализации экстракта липидов и калибровочных расворов. мне необходимо количественное определение общих фосфолипидов.
пробую методику : "1—2 мл взятого на анализ раствора (мой исходный хлороформный экстракт липидов 0,1мл + 1 мл хлороформа) помещают в жаростойкую пробирку, добавляют 0,3 мл концентрированной серной кислоты и осторожно нагревают раствор на горелке, песчаной бане (у меня солевая баня) до тех пор, пока почти полностью выпарится вода и раствор в колбе приобретет бурую окраску.После этого пробирку охлаждают, добавляют 2—3 капли пергидроля и раствор снова нагревают в течение 5—10 мин. Если раствор при этом побуреет, добавляют новую порцию пергидроля. "
проблема: пергидроль не разлогается.добавляю 100 мкл, в меньших кол-вах просветление пробы не идет. раствор пузыриться и я не могу повести фотометрированеи и малахитовым зеленым. нагревала и час, и два, и оставляла в термостате на ночь при 60С.

нагревание с хлорной кислотой тоже не идет - просветления пробы нет.
подскажите, что мне делать!!!руки опускаются уже...
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
chemist-sib
Пользователь
Ранг: 431


15.06.2011 // 17:46:49     
А не хотите попробовать добавлять восстановитель для удаления избытка окислителя из готового минерализата: соли гидразина или гидроксиламина, сульфит натрия..? Концентрацию и объем раствора подобрать методом "научного тыка", хотя бы под контролем йодкрахмальной бумаги.
sinthetic
Пользователь
Ранг: 3367


15.06.2011 // 21:44:45     
А почему нельзя довести образец до кипения, чтобы пероксид водорода разложился? Вы его, видимо, недогреваете.
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1257


15.06.2011 // 23:11:27     
Если время терпит, то могу спросить у своего коллеги завтра днем - он в 70-е плотненько работал над фосфолипидами и спектрофотометрически определял в них фосфор, как раз строил калибровочные кривые и т.д.
kot
Пользователь
Ранг: 1662


16.06.2011 // 8:29:31     

sinthetic пишет:
А почему нельзя довести образец до кипения, чтобы пероксид водорода разложился? Вы его, видимо, недогреваете.
Поддержу сказанное.
2 sinthetic, все хотел спросить а вы что заканчивали (если не секрет, конечно). Просто судя по нику орг.химию? Я вроде тоже.
sinthetic
Пользователь
Ранг: 3367


16.06.2011 // 9:50:54     

kot пишет:

2 sinthetic, все хотел спросить а вы что заканчивали (если не секрет, конечно). Просто судя по нику орг.химию? Я вроде тоже.

Да вроде не секрет...
Химфак Самарского госуниверситета, кафедра орг. химии (+ НИС)
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Аналитический центр контроля качества воды ЗАО «РОСА» Аналитический центр контроля качества воды ЗАО «РОСА»
Специализированный научно-аналитический центр в области аналитического контроля качества воды и других объектов окружающей среды.
kot
Пользователь
Ранг: 1662


16.06.2011 // 12:18:51     

sinthetic пишет:

kot пишет:

2 sinthetic

Да вроде не секрет...

Так может быть у вас и специализация «синтетик», в наше время помню и стар и млад и доктора и стажеры под тягой сиживали и своими руками варили всякую интересную хрень. Это же блин интересно, как было! Причем тогда возможности (как для синтеза так и для анализа ) по сравнению с нынешними были мизерные. А сейчас грят старшее поколение руками в основном «разводит» (во всех смыслах), ну а молодежь смотрит на это и делает соответствующие и не вполне правильные выводы.
Извиняюсь за оффтоп.
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1257


16.06.2011 // 17:26:50     
Редактировано 2 раз(а)

Что у вас за объект? Какая методика экстракции? Так как хлороформная экстракция не самый оптимальный вариант для количественного определения фосфолипидов - большая их часть остается в нативной ткани... Или вы используете хлороформ-метанольную смесь с подкислением?
И еще: желательно из полученного экстракта отбросить нейтральные липиды, чтобы не мешались ))

Минерализация липидного фосфора

В колбу Кьельдаля пипеткой на 5 мл вносили точный объем раствора липидов (10-20 мг). Шлиф и стенки колбы омывали хлороформом и при слабом вакууме выпаривали растворители на кипящей водяной бане. В колбу добавляли 2 капли азотной кислоты и осторожно, не допуская обугливания, нагревали на плитке Кьельдаля (температура внутри колбы 175 градусов) до прекращения интенсивного выделения бурых паров и образования однородной темноокрашенной смеси. Колбу охлаждали до комнатной температуры, вносили 0,3 мл хлорной кислоты и постепенно, при непрерывном помешивании, нагревали до 175 градусов в течение 2-3 минут. После появления тяжелых белых паров, колбу оставляли на плитке при 200 градусах в течение 15-30 минут до полного обесцвечивания кислоты. В охлажденную колбу приливали 0,5 мл раствора аммиака, закрывали резиновой пробкой с втулкой и выдерживали при 100 градусах в вакууме водоструйного насоса до полного выпаривания жидкости и исчезновения аммиачного запаха. В колбу добавляли точно 25 мл воды и перемешивали.

А. В. Жуков, А.Г. Верещагин О количественном определении фосфора в липидах семян сои. Физиология и биохимия культурных растений, том 2, вып. 1, 1970

A.V. Zhukov and A.G. Vereschagin Quantitative determination of phosphorus in soybean lipids. Journal of Lipid Research. - Vol. 10, 1969
innakem
Пользователь
Ранг: 5


16.06.2011 // 22:19:46     

chemist-sib пишет:
А не хотите попробовать добавлять восстановитель для удаления избытка окислителя из готового минерализата: соли гидразина или гидроксиламина, сульфит натрия..? Концентрацию и объем раствора подобрать методом "научного тыка", хотя бы под контролем йодкрахмальной бумаги.
спасибо, попробую.


sinthetic пишет:
А почему нельзя довести образец до кипения, чтобы пероксид водорода разложился? Вы его, видимо, недогреваете.
нагреваю я его, до двух часов нагреваю на соляной бане...температура более чем достаточная. грешу на пергидроль - раздобыла свежий, завтра буду пробовать с ним.


Chamomillablue пишет:
Если время терпит, то могу спросить у своего коллеги завтра днем - он в 70-е плотненько работал над фосфолипидами и спектрофотометрически определял в них фосфор, как раз строил калибровочные кривые и т.д.
спросите, пожалуйста, буду очень благодарна.
innakem
Пользователь
Ранг: 5


16.06.2011 // 22:22:32     
Редактировано 1 раз(а)


Chamomillablue пишет:
Что у вас за объект? Какая методика экстракции? Так как хлороформная экстракция не самый оптимальный вариант для количественного определения фосфолипидов - большая их часть остается в нативной ткани... Или вы используете хлороформ-метанольную смесь с подкислением?
И еще: желательно из полученного экстракта отбросить нейтральные липиды, чтобы не мешались ))
эстрагировала липиды по Фолчу из печени крыс, без подкисления.
спасибо за методику.
innakem
Пользователь
Ранг: 5


16.06.2011 // 22:25:59     
и еще такой вопрос.
нагреваю образец с хлорной кислотой, до просветления и обесцвечивания. довожу остаток водой до 1,5 мл(по методике) - здесь все хорошо. но как только добавляю цветной реактив с малахитовым зеленым - вываливаются зеленые хлопья в огромном кол-ве - муть на всю пробирку. из-за чего такое может быть? в калибровочных образцах все хорошо....
всем спасибо за ответы!

  Ответов в этой теме: 14
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты