Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Капиллярный электрофорез >>>

  Ответов в этой теме: 6

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Капиллярный электрофорез
masterbiochem
Пользователь
Ранг: 5

08.04.2011 // 13:46:40     
В настоящее время мы пытаемся запустить методику определения органических кислот. Буфер 30mМ HIS (гистидина), 120mM MES (морфолиноэтансульфоновой кислоты), 0.05 % тритона-Х-100, детектирование кондуктометрическое, напряжение +30кV, температура 25 С, кондиционировали капилляр 1N NaOH. Все прекрасно разделяется и выходит, но постоянно изменяются времена выхода кислот, дополнительные кондиционирование и промывка не решают эту проблему.

HELP!!!!
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


08.04.2011 // 15:20:51     

masterbiochem пишет:
Все прекрасно разделяется и выходит, но постоянно изменяются времена выхода кислот, дополнительные кондиционирование и промывка не решают эту проблему.

HELP!!!!

А и будут меняться каждый раз. В разных образцах- времена будут тоже меняться (состав образца может влиять). Либо смиритесь, либо кондиционируй капилляр после каждого прогона.
Потом, меняется состав буфера от электролиза- тоже влияет. (Обновляй пробирку с буфером или буфер в пробирке- в зависимости, какая опция есть у твоего КЭ). В общем, намаетесь вы с этим КЭ.
marusya
Пользователь
Ранг: 22


12.04.2011 // 16:53:48     
Редактировано 1 раз(а)

Действительно стоит уделить внимание помывке капилляра между каждым анализом (промывать 0,1 N щелочью и водой). Как я понимаю, вы делаете этот анализ на длинном конце капилляра (классическая методика)? Сколько времени занимает у вас 1 анализ? Возможно,есть смысл попробовать написать метод с короткого конца и снизить вольтаж. Когда работаешь на длинном конце, то буфер быстро истощается (время анализа больше и ,соответственно, ионной силы буфера тратится больше). Ну и состав образца тоже влияет на время миграции. Также, возможно, есть смысл использовать внутренний стандарт, относительно которого вы бы смогли ориентироваться, как сдвинулись времена.
masterbiochem
Пользователь
Ранг: 5


20.04.2011 // 14:12:18     
Мы пробовали проводить анализ как с длинного (45 минут) так и с короткого конца (10 мин) по указанному режиму. В обоих случаях нам не удалось стабилизировать время выхода. После каждого анализа промывали щелочью (2 мин), водой (1 мин) и буфером (15-20 мин) – положительного результата мы не получили. Вследствие того, что плывут времена выхода мы не можем корректно провести калибровку. Использование внутреннего стандарта вряд ли принесет положительный результат, поскольку времена удерживания каждый раз изменяются по-разному (т.е. чем позже выходит вещество, тем сильнее изменяется время).
marusya
Пользователь
Ранг: 22


22.04.2011 // 13:35:20     
Тогда, следующие вопросы: что у вас за оборудование и на каком капилляре работаете?
masterbiochem
Пользователь
Ранг: 5


27.04.2011 // 14:33:00     


У нас система AGILENT CE 7100, капилляр 50мкм общая длина 104 см, образец вводили как с динного, так и скороткого конца капилляра
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Лаборатория химического анализа Управления экологии и безопасности труда РНЦ Лаборатория химического анализа Управления экологии и безопасности труда РНЦ "Курчатовский институт"
Определение элементного состава (валового) различных объектов методом ICP AES
marusya
Пользователь
Ранг: 22


27.04.2011 // 16:54:35     
"Мы пробовали проводить анализ как с длинного (45 минут) так и с короткого конца (10 мин) по указанному режиму. В обоих случаях нам не удалось стабилизировать время выхода. После каждого анализа промывали щелочью (2 мин), водой (1 мин) и буфером (15-20 мин) – положительного результата мы не получили. Вследствие того, что плывут времена выхода мы не можем корректно провести калибровку. Использование внутреннего стандарта вряд ли принесет положительный результат, поскольку времена удерживания каждый раз изменяются по-разному (т.е. чем позже выходит вещество, тем сильнее изменяется время)."
Следующие вопросы: что за "Указанный режим" с короткого конца, которым вы пользовались? У вас не совсем верная схема промывки: в большинстве статей и книг по форезу описана следующая схема - 3 минуты водой, 2 минуты 0,1М щелочью и 3 мин. водой. Перед каждым анализом промываем 2 минуты буфером (это обычно записывается в метод и имеет место быть всегда). Поскольку у вас достаточно длинный капилляр, то следует прибавить по минутке на каждом этапе. Также рекомендовала бы вам взять капилляр покороче (если есть такая возможность), т.к., как я поняла, у вас и с короткого конца все делилось вполне нормально. Просто представьте себе, что ваш буфер истощается гораздо быстрее, пока пробежит по всем 104 см, да еще в течение 45 минут. Попробуйте капилляр 56 см. По поводу внутреннего стандарта-я бы с вами не согласилась-он всегда будет выходить в одном и том же месте и будет мигрировать вместе с вашими кислотами. Также многие специалисты рекомендуют для промывки и для анализа пользоваться разными парами вайл. (рабочий буфер не тратиться зря). Если есть еще вопросы, можете писать мне на почту: bmariyan{coбaчkа}mail.ru

  Ответов в этой теме: 6

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты