| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Определение свободных жирных кислот в плазме >>>
|
 |
| Автор | Тема: Определение свободных жирных кислот в плазме | ||
|
Valek31 Пользователь Ранг: 8 |
 17.11.2010 // 0:19:34
Здравствуйте, уважаемые! Подскажите, пожалуйста, методику определения (экстракции и метилирования) именно свободных жирных кислот в плазме или сыворотке человека. Та, которую я пробовала, не принесла желаемых результатов. Так как митилировались жирные кислоты и из ТАГов и из фосфолипидов. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
virtu VIP Member Ранг: 2134 |
17.11.2010 // 16:50:34
Метод анализа какой? |
||
|
Valek31 Пользователь Ранг: 8 |
17.11.2010 // 17:44:54
метод анализа ГЖХ на колонке для метиловых эфиров жирных кислот. Методика, которую я использовала была следующая: 200мкл плазмы, 200мкл метанольного раствора внутреннего стандарта жирной кислоты, 1 мл 0,05% водного раствора серной кислоты, 3 мл этилацетата, интенсивно перемешать в течении 1 минуты, затем отобрать органический слой, упарить и метилировать в течении 2 ч при 62 С в 2 мл 10% раствора серной кислоты в метаноле. Затем добавить 2 мл гексана и 2 мл насыщенного раствора NaCl, отобрать гексан и упарить. В результате конечно получаются метиловые эфиры жирных кислот. Вся проблемы в том, свободных ли кислот. Так как проведенная методика на ТАГ и фосфатидилхолине тоже показала образование метиловых эфиров. А стандарт свободной жирной кислоты (18:1) по данной методике не дал образование метиловых эфиров. |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2134 |
18.11.2010 // 0:18:22
Редактировано 1 раз(а) 1. Замените на этапе ЖЖЭ свободных ЖК серную кислоту на муравьиную 0.05-0.1%об. в воде. 2. Затем нужно вводить "очистку" на силикагеле и т.д. (ТСХ, ТФЭ и т.д.) от ТАГ и т.д. 3. Затем метилировать (раствор для метилирование готовить перед употреблением, объем можно уменьшить до 500-1000мкл) 15%v H2SO4 в MeOH 60-65oC 60-90мин, а экстрагировать мет. эфиры ЖК хлороформом или ДХМ, а вместо нас. NaCl взять просто воду (соотв. не менее чем 50%об.) |
||
|
Valek31 Пользователь Ранг: 8 |
18.11.2010 // 11:25:19
Спасибо, попробую. Я надеялась что существуют методики, в которых можно было бы избежать ТФЭ. ((( |
||
|
Valeriy Пользователь Ранг: 431 |
18.11.2010 // 11:58:14
Да, существует. ТСХ например, только нужно потом скоблить пластину, либо резать. И то и другое часто приводит к потерям образца. Вероятность перегруза слоя также имеет место. С ТФЭ количественная воспроизводимость будет получше. 
|
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Valek31 Пользователь Ранг: 8 |
18.11.2010 // 12:01:05
Уважаемый Virtu! Посоветуйте пожалуйста на счет ТФЭ. Я хочу взять следующую последовательность элюентов на микроколонке С18 500мг: метанол , затем изопропанол или этилацетат, и затем гексан или хлороформ. |
||
|
Valek31 Пользователь Ранг: 8 |
18.11.2010 // 12:02:14
Спасибо, Валера! ))))))) |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2134 |
18.11.2010 // 13:15:07
Есть, конечно. Вы идете классическим путем. |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2134 |
18.11.2010 // 13:30:58
Редактировано 1 раз(а) МеCN, MeOH и i-PrOH не более 15-20%v + предыдущие растворители, здесь еще многое зависит от кач. состава Ваших аналитов. Надеюсь Вы понимаете, что нужно правильно выбрать то, в чем Вы будете наносить на С18. Т.е. Вы получаете дополнительную стадию с реконструкцией AcOEt => 
|
||
|
Valek31 Пользователь Ранг: 8 |
18.11.2010 // 14:25:41
А если я не хочу идти классическим путем. Есть какие-нибудь альтернативные и более простые методики для определения СЖК в плазме?))) |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
