Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Определение свободных жирных кислот в плазме >>>

  Ответов в этой теме: 16
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Определение свободных жирных кислот в плазме
Valek31
Пользователь
Ранг: 8

17.11.2010 // 0:19:34     
Здравствуйте, уважаемые! Подскажите, пожалуйста, методику определения (экстракции и метилирования) именно свободных жирных кислот в плазме или сыворотке человека. Та, которую я пробовала, не принесла желаемых результатов. Так как митилировались жирные кислоты и из ТАГов и из фосфолипидов.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
virtu
VIP Member
Ранг: 2108


17.11.2010 // 16:50:34     
Метод анализа какой?
Valek31
Пользователь
Ранг: 8


17.11.2010 // 17:44:54     
метод анализа ГЖХ на колонке для метиловых эфиров жирных кислот. Методика, которую я использовала была следующая: 200мкл плазмы, 200мкл метанольного раствора внутреннего стандарта жирной кислоты, 1 мл 0,05% водного раствора серной кислоты, 3 мл этилацетата, интенсивно перемешать в течении 1 минуты, затем отобрать органический слой, упарить и метилировать в течении 2 ч при 62 С в 2 мл 10% раствора серной кислоты в метаноле. Затем добавить 2 мл гексана и 2 мл насыщенного раствора NaCl, отобрать гексан и упарить. В результате конечно получаются метиловые эфиры жирных кислот. Вся проблемы в том, свободных ли кислот. Так как проведенная методика на ТАГ и фосфатидилхолине тоже показала образование метиловых эфиров. А стандарт свободной жирной кислоты (18:1) по данной методике не дал образование метиловых эфиров.
virtu
VIP Member
Ранг: 2108


18.11.2010 // 0:18:22     
Редактировано 1 раз(а)

1. Замените на этапе ЖЖЭ свободных ЖК серную кислоту на муравьиную 0.05-0.1%об. в воде.
2. Затем нужно вводить "очистку" на силикагеле и т.д. (ТСХ, ТФЭ и т.д.) от ТАГ и т.д.
3. Затем метилировать (раствор для метилирование готовить перед употреблением, объем можно уменьшить до 500-1000мкл) 15%v H2SO4 в MeOH 60-65oC 60-90мин, а экстрагировать мет. эфиры ЖК хлороформом или ДХМ, а вместо нас. NaCl взять просто воду (соотв. не менее чем 50%об.)
Valek31
Пользователь
Ранг: 8


18.11.2010 // 11:25:19     
Спасибо, попробую. Я надеялась что существуют методики, в которых можно было бы избежать ТФЭ. (((
Valeriy
Пользователь
Ранг: 431


18.11.2010 // 11:58:14     

Valek31 пишет:
Спасибо, попробую. Я надеялась что существуют методики, в которых можно было бы избежать ТФЭ. (((
Да, существует. ТСХ например, только нужно потом скоблить пластину, либо резать. И то и другое часто приводит к потерям образца. Вероятность перегруза слоя также имеет место. С ТФЭ количественная воспроизводимость будет получше.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
ЦКП-ИАСЦ ОАО «Государственный научно-исследовательский и проектный институт редкометаллической промышленности «Гиредмет» ЦКП-ИАСЦ ОАО «Государственный научно-исследовательский и проектный институт редкометаллической промышленности «Гиредмет»
Оказание услуг в сфере диагностики, сертификации, стандартизации и метрологического обеспечения производства перспективных материалов на основе редких, цветных и драгоценных металлов, высокочистых веществ и полупроводников, минерального и вторичного сырья, полупродуктов, сплавов и пр.
Valek31
Пользователь
Ранг: 8


18.11.2010 // 12:01:05     
Уважаемый Virtu! Посоветуйте пожалуйста на счет ТФЭ. Я хочу взять следующую последовательность элюентов на микроколонке С18 500мг: метанол , затем изопропанол или этилацетат, и затем гексан или хлороформ.
Valek31
Пользователь
Ранг: 8


18.11.2010 // 12:02:14     
Спасибо, Валера! )))))))
virtu
VIP Member
Ранг: 2108


18.11.2010 // 13:15:07     

Valek31 пишет:
Спасибо, попробую. Я надеялась что существуют методики, в которых можно было бы избежать ТФЭ. (((
Есть, конечно.
Вы идете классическим путем.
virtu
VIP Member
Ранг: 2108


18.11.2010 // 13:30:58     
Редактировано 1 раз(а)


Valek31 пишет:
Я хочу взять следующую последовательность элюентов на микроколонке С18 500мг: метанол , затем изопропанол или этилацетат, и затем гексан или хлороформ.
МеCN, MeOH и i-PrOH не более 15-20%v + предыдущие растворители, здесь еще многое зависит от кач. состава Ваших аналитов. Надеюсь Вы понимаете, что нужно правильно выбрать то, в чем Вы будете наносить на С18. Т.е. Вы получаете дополнительную стадию с реконструкцией AcOEt =>
Valek31
Пользователь
Ранг: 8


18.11.2010 // 14:25:41     
А если я не хочу идти классическим путем. Есть какие-нибудь альтернативные и более простые методики для определения СЖК в плазме?)))

  Ответов в этой теме: 16
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты